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新虫 (初入文坛)

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1.初探几丁质酶基因(BGERChi 90)在德国小蠊中是否存在,了解几丁质酶基因在昆虫体内的功能;2. 从提前分离的四个德国小蠊几丁质酶基因中挑选出一条进行克隆、测序及生物信息学分析生物信息学分析,应用生物信息学方法对德国小蠊几丁质酶基因(BGERChi 90)的结构域和功能进行深入研究,以期能利用几丁质酶来降解昆虫含几丁质酶的组织来抑制害虫的正常生理活动,从而达到防治害虫的目的。方法:1.应用半定量RT-PCR方法检测几丁质酶基因在德国小蠊中是否存在;2.从德国小蠊中提取出总RNA,利用简并引物逆转录构建cDNA文库,设计BGERChi 90的引物并对BGERChi 90进行PCR扩增,将扩增的BGERChi 90与质粒载体进行双酶切构建重组质粒,并导入大肠杆菌感受态细胞中克隆,进行阳性克隆筛选,摇菌扩大培养,进行菌落 PCR,将克隆结果送往公司测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果:测得cDNA序列全长为2348bp,其中开放阅读框(ORF)长度为1518bp,编码505个氨基酸。预测该蛋白质的相对分子质量为58.253KDa,理论等电点为6.66,不稳定参数为41.65,为不稳定蛋白质。结论:经序列比对后可知该基因属类18家族糖苷水解酶,是典型的昆虫几丁质酶,因而通过调节昆虫表皮和围食膜的几丁质的完整性和含量,是很好的害虫防治策略,加之高等动物和植物均不含几丁质,以其为靶标的杀虫剂对其他生物体相对安全,因此可围绕几丁质设计开发新型农药品种。
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