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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DH5α
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初手

新虫 (初入文坛)

[交流] DH5α

请问大神们，使用大肠杆菌DH5α做转化，目的基因首先要连接到pUC19质粒上才能转入吗？

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1楼 2017-05-03 20:49:07
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冰之雪域

新虫 (小有名气)
★ ★
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初手(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-04 16:43:31
目的基因无法自己在大肠杆菌种扩增之类的，需要借助相应的载体质粒，所以目的基因首先要构建到你需要的载体质粒上

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初手
3楼2017-05-03 20:58:01
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匿名

用户注销 (小有名气)
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初手
2楼2017-05-03 20:51:38
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sandyes

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼: Originally posted by 初手 at 2017-05-04 08:04:52
那么把目的基因连接到PMD19-T上可以转入DH5α这个感受态吗？
...

没有毒性的话大部分载体都能用DH5a的，特别适用于PGEX系列载体，适用于大构建
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初手
7楼2017-05-04 16:44:55
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初手

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 冰之雪域 at 2017-05-03 20:58:01
目的基因无法自己在大肠杆菌种扩增之类的，需要借助相应的载体质粒，所以目的基因首先要构建到你需要的载体质粒上

那么把目的基因连接到PMD19-T上可以转入DH5α这个感受态吗？

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4楼2017-05-04 08:04:52
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初手

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2楼: Originally posted by 18853812522 at 2017-05-03 20:51:38
连接到载体上才能转入的呀

那么请问目的基因与pUC19的连接方法是怎么样啊

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5楼2017-05-04 08:06:54
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plantviro

新虫 (初入文坛)
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初手(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-04 16:43:41
是的，必须，用连接酶把片段和载体连接上。当然你们实验室有钱可以用重组酶，也非常快。

连接第一可以看分子克隆，第二可以看takara的说明书。网站上可以下说明书
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学海无涯苦做舟，乐做浆
6楼2017-05-04 10:31:11
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relifing

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做转化一定是目的基因和你的质粒连接好了才能转，至于质粒就看你自己选择
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没有伞的孩子，那就努力奔跑吧
8楼2017-05-04 17:10:41
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relifing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 初手 at 2017-05-04 08:04:52
那么把目的基因连接到PMD19-T上可以转入DH5α这个感受态吗？
...

我刚好在做转化，用的载体是PGEX4T-1
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没有伞的孩子，那就努力奔跑吧
9楼2017-05-04 17:12:05
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初手

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by sandyes at 2017-05-04 16:44:55
没有毒性的话大部分载体都能用DH5a的，特别适用于PGEX系列载体，适用于大构建...

好的谢谢

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10楼2017-05-04 18:07:41
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