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NOlll

金虫 (初入文坛)

[交流] 反相高效液相色谱柱子容易堵

我用的waters的液相色谱,Thermo的C18 4.6um*250mm的反相柱,但是做了几次样品就发现柱压上升了,怎么冲都降不下来,我的流动相都是色谱纯的,所以我已经非常小心了,每天来都重新换流动相,做的非标样的样品都过了0.45um的滤膜,然后离心13000RPM10min。用了保护住,但是分析柱柱压还是上升了,求助怎样能降下柱压啊?
流动相是乙腈和水溶液(0.1%的TFA),以前按同样的办法分别的蛋白都没有这种情况,这次的样品已经堵了两根柱子了,现在是第三根了,过镍柱后200mmol的咪唑洗脱液超滤后直接上柱。
现在在考虑要不要先过一遍分子筛啊。。实验一直停滞不前
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随意随意就好了
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杨默格

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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2楼2017-05-03 13:25:55
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NOlll

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 杨默格 at 2017-05-03 13:25:55
浓缩上住的话蛋白浓度会不会太高,稀释一下吧,适当降低流速试试

那个仪器跑流程不能降低流速,而且稀释的话目的蛋白峰太低
随意随意就好了
3楼2017-05-03 20:22:00
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