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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】辅酶的自氧化问题
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[交流] 【求助】辅酶的自氧化问题

不知道各位虫友又没做过带辅酶的酶的特性研究
比如我要降解某些化合物（A,B，C)，为了便于比较，我将酶活单位定义为每分钟NADH的消耗量.采用紫外timecourse检测340nm处的斜率，我做了只加酶和NADH的空白试验用于检测NADH的自氧化作用，按照文献的报道，这个速率应该是很低的，可是我测出来却比较大，100S紫外吸光度从1.5下降到0.8，与我加了底物的差别非常小，我的酶是还原酶，请教向下各位虫友可能的原因是什么？
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1楼 2009-01-06 12:40:51
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
zh1987hs(金币+1,VIP+0):xiexie
NADH在酸性条件下，会很快降解的，所以要用缓冲液做
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帮助虫友，提升自己
2楼2009-01-06 17:32:38
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by charon1982 at 2009-1-6 17:32:
NADH在酸性条件下，会很快降解的，所以要用缓冲液做

谢谢你的指教。。。但是我是在PH8.0的TRIS-Hcl中做的。。。。不知道是否还会有其它原因？
附：我做的酶是氧化还原酶，涉及电子传递。。但现在想用以降解某些化合物，还不知道是否可行。会不会是因为相对于底物，NADH的Km值要远远小于这些非自然底物呢？
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3楼2009-01-06 21:18:02
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
★
zh1987hs(金币+1,VIP+0):xiexie
请问用的是什么型号的仪器？ Dank!
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4楼2009-01-06 21:47:15
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by qgaoamtf at 2009-1-6 21:47:
请问用的是什么型号的仪器？ Dank!

汗。。。。这个会是问题的原因吗？哈哈
回去查查。。。。只知道是JASCO公司的
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5楼2009-01-06 22:42:51
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
NADH的浓度？ 起始OD1.5？

[ Last edited by qgaoamtf on 2009-1-6 at 23:43 ]
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6楼2009-01-06 23:42:14
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by qgaoamtf at 2009-1-6 23:42:
NADH的浓度？ 起始OD1.5？

[ Last edited by qgaoamtf on 2009-1-6 at 23:43 ]

7mg/ml
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7楼2009-01-07 07:22:58
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
zh1987hs(金币+3,VIP+0):好的，谢谢
引用回帖:
Originally posted by zh1987hs at 2009/1/7 07:22:

7mg/ml

浓度太高了！ 我见到的通常为0.128-0.2mM（ca. 100-150 mg/L)， 试一下这个或其它范围。
Good luck!
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8楼2009-01-08 00:33:43
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