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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[交流] 【求助】辅酶的自氧化问题

不知道各位虫友又没做过带辅酶的酶的特性研究
比如我要降解某些化合物(A,B,C),为了便于比较,我将酶活单位定义为每分钟NADH的消耗量.采用紫外timecourse检测340nm处的斜率,我做了只加酶和NADH的空白试验用于检测NADH的自氧化作用,按照文献的报道,这个速率应该是很低的,可是我测出来却比较大,100S紫外吸光度从1.5下降到0.8,与我加了底物的差别非常小,我的酶是还原酶,请教向下各位虫友可能的原因是什么?
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


zh1987hs(金币+1,VIP+0):xiexie
NADH在酸性条件下,会很快降解的,所以要用缓冲液做
帮助虫友,提升自己
2楼2009-01-06 17:32:38
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

引用回帖:
Originally posted by charon1982 at 2009-1-6 17:32:
NADH在酸性条件下,会很快降解的,所以要用缓冲液做

谢谢你的指教。。。但是我是在PH8.0的TRIS-Hcl中做的。。。。不知道是否还会有其它原因?
附:我做的酶是氧化还原酶,涉及电子传递。。但现在想用以降解某些化合物,还不知道是否可行。会不会是因为相对于底物,NADH的Km值要远远小于这些非自然底物呢?
3楼2009-01-06 21:18:02
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)


zh1987hs(金币+1,VIP+0):xiexie
请问用的是什么型号的仪器? Dank!
4楼2009-01-06 21:47:15
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

引用回帖:
Originally posted by qgaoamtf at 2009-1-6 21:47:
请问用的是什么型号的仪器? Dank!

汗。。。。这个会是问题的原因吗?哈哈
回去查查。。。。只知道是JASCO公司的
5楼2009-01-06 22:42:51
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

NADH的浓度? 起始OD1.5?

[ Last edited by qgaoamtf on 2009-1-6 at 23:43 ]
6楼2009-01-06 23:42:14
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

引用回帖:
Originally posted by qgaoamtf at 2009-1-6 23:42:
NADH的浓度? 起始OD1.5?

[ Last edited by qgaoamtf on 2009-1-6 at 23:43 ]

7mg/ml
7楼2009-01-07 07:22:58
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

★ ★ ★
zh1987hs(金币+3,VIP+0):好的,谢谢
引用回帖:
Originally posted by zh1987hs at 2009/1/7 07:22:

7mg/ml

浓度太高了! 我见到的通常为0.128-0.2mM(ca. 100-150 mg/L), 试一下这个或其它范围。
Good luck!
8楼2009-01-08 00:33:43
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