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2017mwl

新虫 (小有名气)

[交流] 提rna逆转录 已有8人参与

如果提取的rna 被降解反转录后还能跑出条带么

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1楼 2017-04-27 21:41:11
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蛋蛋不是蛋

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不能吧，我最近也在做这个，提出来的RNA老是降解

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2楼2017-04-27 21:58:01
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vmp651312

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有反转录后跑胶的吧？要么提取RNA后电泳，要么反转录 PCR后电泳！我理解反转录后的cDNA应该是长度不一的核苷酸片段，是混合物，不知道对不对！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

2017mwl
3楼2017-04-28 09:44:33
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宁文峰

新虫 (小有名气)
显然不能

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所追求的不在明天，而在现在以前
4楼2017-04-28 11:53:59
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2017mwl

新虫 (小有名气)
送红花一朵
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3楼: Originally posted by vmp651312 at 2017-04-28 09:44:33
没有反转录后跑胶的吧？要么提取RNA后电泳，要么反转录 PCR后电泳！我理解反转录后的cDNA应该是长度不一的核苷酸片段，是混合物，不知道对不对！

嗯嗯 我提rna跑胶验证 跑了30分钟照胶显示降解了 做了反转录出现三条带 但都不是目的条带 扩增后出现了目的基因 在300bp左右 但是还有部分杂带

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5楼2017-04-28 14:50:20
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 宁文峰 at 2017-04-28 11:53:59
显然不能

嗯嗯

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6楼2017-04-28 14:50:45
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稻草人儿

新虫 (小有名气)
★
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我当初第一次提RNA是直接从复苏的细胞里提的，反转录之后用pcr跑胶没有显示。第二次是养的p2代细胞提取的，反转录之后有。给楼主建议反转录之后用引物扩增你的目的片段看看跑胶结果。

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7楼2017-04-30 15:23:45
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 稻草人儿 at 2017-04-30 15:23:45
我当初第一次提RNA是直接从复苏的细胞里提的，反转录之后用pcr跑胶没有显示。第二次是养的p2代细胞提取的，反转录之后有。给楼主建议反转录之后用引物扩增你的目的片段看看跑胶结果。
...

嗯嗯 pcr后跑胶有目的条带

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8楼2017-04-30 15:31:38
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稻草人儿

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-04-30 15:31:38
嗯嗯 pcr后跑胶有目的条带
...

那就应该不是降解的问题

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9楼2017-04-30 15:33:15
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稻草人儿

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 稻草人儿 at 2017-04-30 15:33:15
那就应该不是降解的问题
...

降解的话会有很明显的条带痕迹。楼主最近也在做分子克隆吗？

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10楼2017-04-30 15:37:47
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