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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 表达载体与目的基因连接不上
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T_Stranger

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by gufeng2008 at 2017-04-28 15:33:50
要做对照，估计表达载体pET28酶切不完全，而且连接效率又不高，所以导致空载体长出菌，就会P一个目的条带都没有。

双酶切体系三个多小时，pET28也就五千多bp，应该能切差不多了吧，胶回收跑的还挺齐

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11楼2017-05-05 19:04:13
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匿名

木虫 (小有名气)

小志
★
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12楼2017-05-05 23:20:48
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Cruiser肖

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
P出来基因有没有问题，建议先测序，不然是浪费时间

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西西sm
13楼2017-05-05 23:50:52
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西西sm

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by Cruiser肖 at 2017-05-05 23:50:52
P出来基因有没有问题，建议先测序，不然是浪费时间

p得出来，但是测序全是空质粒怎么解释啊？在线等

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14楼2017-05-07 12:34:10
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qazwsxmmi

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到了相同的问题，前几天做这个实验也是假阳性。后来我老师说是酶切没有成功。看看是不是酶过期失效了，或者是酶切条件不合适，然后再看看基因或者载体质粒浓度是不是太高了，导致酶切无法进行。我也没有找出原因来
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努力才是最真的
15楼2017-08-06 14:41:10
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