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新虫 (初入文坛)

[求助] 反相纯化过载问题 已有2人参与

刚开始学习做反相纯化,想请教:我的反相柱增大上样量后,整个洗脱峰就会提前出峰,而且是向左爬着,有人说是过载引起的。低压柱子上过载不就穿透出来了吗?反相的过载请大侠给解释一下这个过程,不胜感激

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今日为鬼他日成仙
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残夜流月

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反相纯化分离时,样品一般都溶解在平衡液里面,所以上样的时候也在进行着洗脱分离的程序,而当上样浓度不变,提高上样量之后,上样体积也随之增大,上样时间变长,分离效果就不好了。不知道你检测是从上样开始检测还是上样完成后再检测的?
做好每件事,活好每一天
2楼2017-04-26 15:55:37
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td521td

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 残夜流月 at 2017-04-26 15:55:37
反相纯化分离时,样品一般都溶解在平衡液里面,所以上样的时候也在进行着洗脱分离的程序,而当上样浓度不变,提高上样量之后,上样体积也随之增大,上样时间变长,分离效果就不好了。不知道你检测是从上样开始检测还 ...

AKTA系统,280nm全程检测

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今日为鬼他日成仙
3楼2017-04-27 18:24:43
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

可以这样理解。反相填料强疏水基团的量即载量是一定的。同样条件下可抓取疏水性物质的量自然是一定的,作用强度也基本一定的。过量上样后,因为填料基团量的有限,可作用强度有限,部分物质与填料间的吸附作用减弱,那么提升有机溶剂浓度洗脱时,在低有机溶剂的作用下即可洗脱,出现峰前移现象。

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4楼2017-08-29 11:44:44
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