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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 求大家帮我看看ELISA空白过高是不是HRP的问题？
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chesto36

新虫 (小有名气)

[求助] 求大家帮我看看ELISA空白过高是不是HRP的问题？ 已有1人参与

因为空白过高，甚至可以达到2以上的OD值。
一开始怀疑是封闭的问题，封闭液换过BSA，酪蛋白，脱脂奶粉，但都没什么大的变化，OD依旧在2左右
因为我的酶标二抗是自己偶联的，电泳图也证明偶联上了，现在怀疑是HPR的问题，最近做了一组包被脱脂奶粉/酪蛋白，直接加HRP，发现低浓度的HRP显色较浅，高浓度的HRP还是很黄，理论上来说无论是高浓度还是低浓度都不应该显色的，但是HRP为什么会和我的各种蛋白有非特异性结合呢？百思不得其解，求各位大神帮帮忙，帮我分析分析。
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1楼 2017-04-26 09:27:21
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也可能是显色液的原因，显色液两个底物间自己会发生缓慢的反应，还有如果问题是你酶标二抗偶联后出现的，问题也很有可能出在酶联二抗上。
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2楼2017-04-26 17:19:14
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tgygdt62
3楼2017-08-20 08:18:09
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