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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR四个目的基因p出来了但内参18s P不出来，请问什么原因？？
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上官海泠

金虫 (小有名气)

Hooker

[求助] qPCR四个目的基因p出来了但内参18s P不出来，请问什么原因？？

两幅图分别是提取真菌中总RNA电泳图，和QPCR结果（t处理，ck对照）。可以看出目的基因已经出现有ct值，但是内参18s没有测出。处理组RNA浓度，200多ng/ul和80多ng/ul，对照是60多ng/ul，A260/A280 2.1左右。提取后直接-80度保存一个多星期在反转录使用。不知道为什么内参基因P不出？？求解

qPCR四个目的基因p出来了但内参18s  P不出来，请问什么原因？？
d8 la处理和ck 总RNA.jpg


qPCR四个目的基因p出来了但内参18s  P不出来，请问什么原因？？-1
(2IK$VTW))~5QW0FA$]DS_I.png
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Smileisbeautifulandwearitmoreoften.
1楼 2017-04-22 18:22:42
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oylb

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2017-04-22 18:37:43
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上官海泠

金虫 (小有名气)

Hooker
引用回帖:
2楼: Originally posted by oylb at 2017-04-22 18:37:43
反转录方法？oligodT反转吗？

是的 用的是试剂盒mix
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Smileisbeautifulandwearitmoreoften.
3楼2017-04-22 18:43:44
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上官海泠

金虫 (小有名气)

Hooker
引用回帖:
2楼: Originally posted by oylb at 2017-04-22 18:37:43
反转录方法？oligodT反转吗？

用Novo试剂盒 两步法 显示RNA和无酶水共10ul 65度五分钟 然后加10ulmix 42度 1h 72度5min
赞一下 回复此楼
Smileisbeautifulandwearitmoreoften.
4楼2017-04-22 18:46:44
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上官海泠

金虫 (小有名气)

Hooker
引用回帖:
2楼: Originally posted by oylb at 2017-04-22 18:37:43
反转录方法？oligodT反转吗？

反转录的引物加400ng 左右
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Smileisbeautifulandwearitmoreoften.
5楼2017-04-22 18:48:57
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xxl520zry
a

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-04-22 18:54:04
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oylb

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2017-04-22 20:02:28
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cxh90

新虫 (著名写手)
先普通PCR看看内参基因能不能跑出来

发自小木虫Android客户端
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8楼2017-04-23 08:07:50
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梦幻心雨

银虫 (小有名气)
你好，请问你在做qPCR时，除了对照组（ck）外，有做 无模板阴性对照吗？谢谢！
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科研工作于我若即若离。。。
9楼2017-05-25 19:18:04
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贝风格l

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cxh90 at 2017-04-23 08:07:50
先普通PCR看看内参基因能不能跑出来

如果能呢，请问可能是什么原因

发自小木虫IOS客户端
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10楼2018-02-03 10:46:06
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