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Catherine92

金虫 (小有名气)

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[交流] 你一定要知道的 Western Blot 实验的四大经验！

Western Blot 中文名称“蛋白免疫印迹反应”，是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相载体上，而后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
此项技术向来是会的人做着有趣，没掌握诀窍的人做起来蓝瘦，香菇。
这就带你提炼一下实验技巧。

工欲善其事，必先利其器。
Western Blot实验设备，若是刚刚开始搭建该平台，有条件的可以找专业的公司直接为你搭配，省心省力。也可以自行选择，需要自己多花时间和精力搜集资料，总结来说，根据操作步骤来准备主要如下：
一：电泳
电泳仪、制胶板、电泳槽。可以选择国外的，但是价格肯定是不便宜的。而且据小编所知的国外某品牌的电泳槽是用绿色塑料夹住玻璃板来组成内槽，容易漏液，塑料夹应该是有疲劳寿命的，估计日子一长，弹性就会改变，所以聪明的实验室会在用很久之后，定期更换电泳仪系统。我大中华的制造力也是不容小觑的，国内有一款电泳仪的垂直槽跟转移槽很好用，型号是DYY-11型电脑三恒多用电泳仪。
二：转膜
如果是使用湿转的话，只要在有电泳仪的基础上再买一套湿转的槽，就ok了。如果想使用干转的话，还需要另外购买半干转仪，有的实验室用半干转，价钱大概是免税15000元左右。
三：漂洗
只需要购买一个脱色摇床就ok。用到摇床，一般是两种，一个左右rolling的那种，一个是圆周运动的那种，都需要。
四：显影
如果使用传统的X光片，需要准备一个暗室，还有就是买个红外灯就可以了。如果要用直接扫描显影的话，需要购买一台成像系统，不是凝胶成像，是针对膜上蛋白的成像系统，有的实验室用的是odyssey近红外双色扫描系统，免税价格大概为56000美金，也有国产类似的产品，价格会稍微便宜些。
五：凝胶图像分析
发光液选择也很重要，市场上发光液种类很多，根据多年实验了解美国advansta和密理博的发光液效果不错。
将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值，比如VILBER的凝胶成像、多色荧光及活体成像系统。