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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，RNA电泳无条带，原因。
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歆予昕

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，RNA电泳无条带，原因。 已有2人参与

最近做了一个骨髓细胞的PCR。
正常提取RNA后，测得RNA浓度为900多ng/ul。但是RNA电泳0.8%的胶，发现没有条带。
后期进行了反转后，CDNA浓度也有600多，
进行了RT-PCR，touchdown，跑2%胶，发现ACTIN有条带，但是很淡，目的基因没有条带。

想问一下原因是啥？？？

求助，RNA电泳无条带，原因。
2017-4-19 td PCR.jpg
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1楼 2017-04-20 17:32:41
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bestzdz

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
歆予昕(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-26 16:35:42
测RNA浓度时的A260/A280值是多少？如果高于2的话说明RNA降解严重，自然没法跑出条带，也没法反转录出好的cDNA
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学海无涯，乐在其中；谨言慎行，惜时自勉！
2楼2017-04-21 13:58:35
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歆予昕

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bestzdz at 2017-04-21 13:58:35
测RNA浓度时的A260/A280值是多少？如果高于2的话说明RNA降解严重，自然没法跑出条带，也没法反转录出好的cDNA

测260/280 比值接近1.9啊
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3楼2017-04-25 14:07:48
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

★
歆予昕(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-26 16:35:53
不要太依赖测出来的数值，RNA跑胶结果比较能说明问题，内参一般都是较小的片段。RNA没有想象中降解那么快，规范操作。
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想做一位科研好人
4楼2017-04-25 15:25:22
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
cDNA浓度这么高？反转录之前你消化DNA了吗？

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-04-25 15:36:45
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歆予昕

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-04-25 15:36:45
cDNA浓度这么高？反转录之前你消化DNA了吗？

木有，当时没想到这么难做
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6楼2017-04-26 15:45:32
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