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新虫 (初入文坛)

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[求助] 壳聚糖固定化蛋白质总是不成功已有3人参与

做壳聚糖固定化酶3个多月了，一直都失败，
最开始做的是壳聚糖膜，将膜在京尼平和戊二醛溶液（1mmol/L）中50度处理5小时，蒸馏水清洗后取了20平方厘米，加入BSA溶液（1mg/ml），常温下轻微振摇12h，然后测上清液中的蛋白质含量，跟没有添加膜的蛋白质含量根本没有区别，用的考马斯亮蓝法。
也尝试了将交联剂直接加到成膜溶液中成膜，做固定化，同样的，上清液中蛋白质含量根本没有减少，
然后做了直径2mm的壳聚糖微球，用交联剂处理后同样接不上去酶，有没有人知道问题出在哪里？
看文献里也是这么做的啊
只有8个金币，请求有做过的人指导一下

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1楼 2017-04-17 16:38:41

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之信生物

新虫 (初入文坛)

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专业: 植物资源学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

第一种方法：最开始做的是壳聚糖膜，将膜在京尼平和戊二醛溶液（1mmol/L）中50度处理5小时，蒸馏水清洗后取了20平方厘米，加入BSA溶液（1mg/ml），常温下轻微振摇12h，然后测上清液中的蛋白质含量，跟没有添加膜的蛋白质含量根本没有区别，用的考马斯亮蓝法。
可能原因：壳聚糖膜在京尼平和戊二醛溶液（1mmol/L）中50度处理5小时后，壳聚糖中的氨基会与京尼平发生反应，反应后膜变成蓝色，取出清洗后不再与BSA反应，所以上清液中BSA含量不变。