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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 功能材料 » 基础研究 » 壳聚糖固定化蛋白质 总是不成功
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i52014a

新虫 (初入文坛)

[求助] 壳聚糖固定化蛋白质 总是不成功 已有3人参与

做壳聚糖固定化酶3个多月了，一直都失败，
最开始做的是壳聚糖膜，将膜在京尼平和戊二醛溶液（1mmol/L）中50度处理5小时，蒸馏水清洗后取了20平方厘米，加入BSA溶液（1mg/ml），常温下轻微振摇12h，然后测上清液中的蛋白质含量，跟没有添加膜的蛋白质含量根本没有区别，用的考马斯亮蓝法。
也尝试了将交联剂直接加到成膜溶液中成膜，做固定化，同样 的，上清液中蛋白质含量根本没有减少，
然后做了直径2mm的壳聚糖微球，用交联剂处理后同样接不上去酶，有没有人知道问题出在哪里？
看文献里也是这么做的啊
只有8个金币，请求有做过的人指导一下
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1楼 2017-04-17 16:38:41
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之信生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一种方法：最开始做的是壳聚糖膜，将膜在京尼平和戊二醛溶液（1mmol/L）中50度处理5小时，蒸馏水清洗后取了20平方厘米，加入BSA溶液（1mg/ml），常温下轻微振摇12h，然后测上清液中的蛋白质含量，跟没有添加膜的蛋白质含量根本没有区别，用的考马斯亮蓝法。
可能原因：壳聚糖膜在京尼平和戊二醛溶液（1mmol/L）中50度处理5小时后，壳聚糖中的氨基会与京尼平发生反应，反应后膜变成蓝色，取出清洗后不再与BSA反应，所以上清液中BSA含量不变。
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2楼2017-04-19 07:36:45
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之信生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第二，将交联剂直接加到成膜溶液中成膜，做固定化，同样 的，上清液中蛋白质含量根本没有减少。
与第一种方法基本相同，还是京尼平已经跟壳聚糖发生反应了，不再与BSA反应。
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3楼2017-04-19 07:38:19
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之信生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第三，做了直径2mm的壳聚糖微球，用交联剂处理后同样接不上去酶，还是一样的原因。
建议：
试试将壳聚糖，京尼平，BSA同时加到一起，50度交联反应5小时左右，应该可以将BSA交联到壳聚糖分子上面。具体做法：按第二种方法，将交联剂京尼平与壳聚糖，BSA一起配成溶液，成膜，即可。
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4楼2017-04-19 07:44:30
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多吉桑

新虫 (小有名气)
你好，想问你一下BSA考马斯亮蓝测定标曲的溶液是用水配还pbs溶液配？还有那个测吸光度时的对照溶液是考马斯亮蓝染色液吧？

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5楼2017-05-17 12:08:30
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