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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 提取RNA，氢氧化钠到底能不能去除RNA酶
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gytjyb

新虫 (小有名气)

[交流] 提取RNA，氢氧化钠到底能不能去除RNA酶

大家都知道，提取RNA的时候，去除RNA酶污染，有时候是非常关键的。好多情况下，我们都是在用DEPC，但是DEPC有毒，又容易和Tris试剂中的巯基反应，没办法配制Tris试剂。
我看到过一些资料好像是说氢氧化钠配制的溶液也可以去除RNA酶，按照道理来讲，高浓度的碱可以使得蛋白变性，自然也可以使得RNA酶变性。
然后我试了试，我配制1Mol/L的氢氧化钠,这个浓度已经很高了，用配制的氢氧化钠去处理了一些吸管，烧杯，提取过程中要用到的东西。然后我又用无RNA酶水（这个实验室以前配制了不少）泡了泡这些氢氧化钠处理过的吸管烧杯之类的东西。自然，我也提取RNA试了试，似乎却没有成功。我发现最后提取的RNA浓度低，仅仅为20纳克/微升。虽然A260/A280，比值能到1.98，还不错。但是浓度很低。我跑电泳就能够猜到，没有看出来有条带。自然我后面做PCR的actin也没有结果。虽然我这次用到的组织样，可能很少，只有小指甲的三分之一，但对于是否提取出来了RNA，我依然产生了怀疑。
幸亏我是做一个植物标本，我还有无限制的样本可以让我折腾。因此我想问的是，NaOH到底能不能去除RNA酶污染。
如果可以，该怎么用。该怎么用，该怎么用。
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1楼 2017-04-17 09:41:49
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weiyf11

新虫 (初入文坛)
★
gytjyb(金币+2): 谢谢参与
1MNaOH加 0.5%SDS可以配成RNA酶抑制剂。不过我推荐用生工出品的RNA酶固体表面清除剂，50块钱一瓶，不贵，千乘稀释后的浸泡可能沾RNA的固体表面过夜，跑电泳什么的都没问题。其实这种表面清除剂的成分其实似乎就是NaOH+SDS
另外，提RNA的效率和很多因素有关，楼主的材料和提RNA的试剂可能都是关键
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4楼2017-04-17 19:32:41
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gytjyb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weiyf11 at 2017-04-17 19:32:41
1MNaOH加 0.5%SDS可以配成RNA酶抑制剂。不过我推荐用生工出品的RNA酶固体表面清除剂，50块钱一瓶，不贵，千乘稀释后的浸泡可能沾RNA的固体表面过夜，跑电泳什么的都没问题。其实这种表面清除剂的成分其实似乎就是Na ...

多谢，只是不知，如果这样可以，单独加个1M的氢氧化钠行不行，难道一定要加SDS。
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5楼2017-05-13 11:54:49
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冰雪诺2楼
2017-04-17 09:51   回复  
gytjyb(金币+2): 谢谢参与
，， 发自小木虫Android客户端
热血江湖笑3楼
2017-04-17 10:09   回复  
gytjyb(金币+2): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
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