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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 请教如何利用内外标法分析
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joy211087

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 请教如何利用内外标法分析

各位大侠，你们好，小弟最近要开始做一些分析，但是由于以前对液相色谱不是很懂，能否请教大家如何选用内外标法测量反应液中的各种产物？根据什么选择内外标？请给举例子可以么，我在网上看了一些介绍，但是仍然不懂，最好您能给出一个具体的例子，举例如何计算？
小弟的反应液最后含有苯酚钠，对二苯甲酸钠，甲苯，苯乙醇，碳酸钠
请举个例子吧，谢谢了，金币大大奉送。
joy211087@126.com
您也可以写详细点给我个附件发邮箱里。

[ Last edited by joy211087 on 2009-1-3 at 04:43 ]
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1楼 2009-01-03 04:32:41
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lchn18

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
joy211087(金币+5,VIP+0):谢谢你
我给你说一下我当时是怎么做的吧
我当时做的是酒精的分析，用的GC方法就是内标法，虽然你用的是HPLC但方法有相似的地方，都是内标法
内标物：正丁醇
1.先用标准液（技术监督局买的标准酒精，里面个组分的含量已知，注意它里面含有内标物正丁醇）分析，得到标准液个组分的保留时间等信息，可采用进多针，多次校正得到各组分的标线。
2.就可以准备分析样品，首先将样品（酒精）放如10微升的容量瓶中，在里面加入内标物（色谱级正丁醇，加的体积已知），混匀后就可以进样分析，最后得到谱图，积分完毕后，酒精里面的组分名和含量都会出现，组分名在谱峰上显示出来。
酒精的组分一般含有：（按出峰顺序）乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丁醇、正丁醇（内标物，因标样里有）、异戊醇
本方法是通过样品加内标的检出峰和标样里的正丁醇检出峰做对比，其他组分的峰面积再和正丁醇比较，最后得出各组分的含量。


内标物的选择
      内标物的选择基本原则是原样品中不存在的纯物质，性质与被测物质相近，能完全溶解于样品，不与样品发生化学反应。内标物保留值与待测样品尽量接近但还要达到基线分离。注意内标物的称样量要根据待测样品的大致含量决定，最终使内标物的峰面积和质量与待测样品的峰面积和质量尽量相差不多，这样可以减少误差。

[ Last edited by lchn18 on 2009-1-5 at 18:15 ]
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6楼2009-01-05 18:07:29
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leijiang

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
joy211087(金币+5,VIP+0):谢谢
什么叫内标法?怎样选择内标物?
内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。

在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?

影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。
由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。
化学方面的因素包括：
1、内标物在样品里混合不好；
2、内标物和样品组分之间发生反应，
3、内标物纯度可变等。
对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话，应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定在制作内标标准曲线时应注意什么?

在用内标法做色话定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等)，还应注明进样体积和内标物浓度。在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值与平均值的偏差小于2，曲线仍可使用，若大于2，则应重作曲线，如果曲线在铰短时期内即产生变动，则不宜使用内标法定量。
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2楼2009-01-03 08:24:44
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jsys

荣誉版主 (著名写手)

博洋Lab
★ ★ ★ ★ ★
joy211087(金币+5,VIP+0):谢谢你
你所说的问题不是完全的清楚啊，比如你想要测什么啊，里面的东西含量有多少啊，这些都是很重要的信息啊，比如你就想测里面的碳酸钠，那还做什么色谱啊，而且你这些东西有些物质是很难相溶的，比如甲苯和其它的盐类就很难溶的，你说是吗？而且你用什么具体仪器做也没说清，比如说用AGILENT1200自动进样来做的话，我做内标没什么意义啊，因为光内标物的选择你就要下太大的功夫来找，还要确定你的内标物的稳定性，及和其它的物质的分离情况，而这些都做好了，费的劲也太大了，现在如果你用我上面说的仪器来做的话，那做外标是再好不过了，现在的仪器的稳定性都非常的好，准确度也非常的高，你还担心什么，一般现在做内标的话只有两种可能才用，第一是有药典的或国标的规定的方法，你一般不能改动，第二就是你做工艺过程中只想粗略的观察一种原料的反应情况，和产品的生成情况，而其它的你不太关心。这时一般有喜欢做内标的，但说实在的内标现在有点过时了，这是以前没有自动进样和好稳定性仪器的情况下想出来的，现在已经有点太过麻烦了。一般做较正归一化足以解决绝大部分分析问题，如果想要准确的话，那做外标也是很方便的啊。当然如果你的项目很大，想长年用这样的方法来分析也可以选内标的方法来做，不过你所提供的信息太少，如果你能详细说明你的大体工艺和分析的目的以及你现有的仪器情况的话，找个内标物是不难的，前面说的选择方法很对，也很详细的，如果你提供的更多，我想我能为你提供一个更好的分析方法的。
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3楼2009-01-03 14:30:50
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chency520

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
joy211087(金币+5,VIP+0):谢谢你
（1）外标法 外标法是所有定量分析中最通用的一种方法，即所谓校准曲线法。外标法简便，不需要校正因子，但进样量要求十分准确，操作条件也需严格控制。它适用于日常控制分析和大量同类样品的分析。
（2）内标法 为了克服外标法的缺点，可采用内标校准曲线法。这种方法的特点是：选择一内标物质，以固定的浓度加入标准溶液和样品溶液中，以抵消实验条件和进样量变化带来的误差。内标法的校准曲线（见图19-16）是用Ai／As对xi作图，其中As为内标物的峰面积。通过原点的直线可表示为 Xi = Ki *(Ai/As)*100%

比如你测二苯甲酸钠
1.用外标法测时，须先称二苯甲酸钠对照品的量，再用色谱记录对照品的峰面积，计算单位峰面积对应的对照品的量，后根据你样品中二苯甲酸钠的峰面积就可以算出样品中含有多少二苯甲酸钠。
2.用内标法时，你需先选内标物质，比如二苯甲酮等，同理，须先称二苯甲酸钠对照品的量，但在对照品和样品中均要加入相同体积的内标物质，计算方法同外标，只不过是根据二苯甲酸钠对照品峰面积与内标物质峰面积的比值来折算，而不是单独用二苯甲酸钠的峰面积。
一般内标法只有在样品量少的情况下采用，外标法用得多些。
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4楼2009-01-05 14:58:58
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