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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白条带跑不开？谁能帮帮我呀！！
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★

[交流] 蛋白条带跑不开？谁能帮帮我呀！！

从小麦籽粒中提取醇溶蛋白电泳，发现下胶之后玻璃板上有明显的白色条纹，染色后在白色条纹的地方就会染出波浪式的东西，看上去蛋白没有跑开？不知道是什么原因。我用的是单一胶，没有浓缩胶和分离胶那么一说。本来前几天已经没有问题了，可是突然之间久出现饿这个问题，仪器药品都没有更换，电压还是恒压500跑的，实在想不出来是什么原因了！请高手给指教一下，小弟跪谢了~~~
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1楼 2009-01-02 21:18:30
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zct2008

至尊木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢帮助~
下胶之后玻璃板上有明显的白色条纹，可能是玻璃板没洗干净，需要将玻璃板洗干净，晾干。
另外电泳时最好挂冰盒，使玻璃板温度不要太高，最重要的是受热要均匀，这样就不会出现波浪式的东西。

不知道对不对，希望能有所帮助。
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
2楼2009-01-02 21:31:44
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★
引用回帖:
Originally posted by zct2008 at 2009-1-2 21:31:
下胶之后玻璃板上有明显的白色条纹，可能是玻璃板没洗干净，需要将玻璃板洗干净，晾干。
另外电泳时最好挂冰盒，使玻璃板温度不要太高，最重要的是受热要均匀，这样就不会出现波浪式的东西。

不知道对不对，希 ...

谢谢指教！不过我已经连续跑了还几次这样的了，玻璃板的清洗我也注意过了，而且跑胶过程中一直通以恒定的水流降温，难道这样还受热不均匀吗？明天再试试。以前挺好的，就是这几次，很突然。
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3楼2009-01-02 22:02:41
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
我以前做的是大豆的醇溶蛋白,应该可以有点建议吧.不知道你所说的玻璃板上的白色条带是何种情况.另外,条带的弯曲是横向的呢(与蛋白条带同向)还是纵向的呢.
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4楼2009-01-02 22:16:20
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★
引用回帖:
Originally posted by gr0613 at 2009-1-2 22:16:
我以前做的是大豆的醇溶蛋白,应该可以有点建议吧.不知道你所说的玻璃板上的白色条带是何种情况.另外,条带的弯曲是横向的呢(与蛋白条带同向)还是纵向的呢.

下板之后不用染色就可以看见上面的白色条纹，就在蛋白泳道上堆积，好像是到那就跑不动了，弯曲的方向应该是和蛋白同向的，那个地方的染色最深。还请指教！
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5楼2009-01-02 22:39:24
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mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)
电泳缓冲液用了多少次了？跑的时候有没有看一下电流是多少？
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6楼2009-01-05 15:36:02
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★
引用回帖:
Originally posted by mwgyanchu at 2009-1-5 15:36:
电泳缓冲液用了多少次了？跑的时候有没有看一下电流是多少？

每次都是新配的！这点可以放心。
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7楼2009-01-05 19:31:13
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by herwan at 2009-1-2 22:39:



下板之后不用染色就可以看见上面的白色条纹，就在蛋白泳道上堆积，好像是到那就跑不动了，弯曲的方向应该是和蛋白同向的，那个地方的染色最深。还请指教！

是SDS-PAGE？
这是正常的。又不是所有的东西都能跑进胶里。我在做细菌外膜蛋白的时候也出现过这样的事情，粘度太大造成的，应该不影响结果吧。
说的不好，请指教
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8楼2009-01-09 18:11:54
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有缘千里

银虫 (小有名气)
感觉是做电泳的样品里有未溶解的固体。你在配制上样样品之前先离心一下，取上清液和buffer混合。那样可能就没有白色的条文了。你的条带弯曲也是由于样品不均匀造成的，估计是不溶物跑到胶里去了。有的跑的快，有的跑的慢，所以波浪形。
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9楼2009-01-09 20:11:30
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