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蜗牛上的女孩

铜虫 (小有名气)

[求助] WB求助 已有4人参与

三个样本,第一个孔正常条带,后面两个内参很弱很弱,几乎看不到条带,但是目的条带有,比较明显!蛋白测过浓度,浓度不低的,一起测的。怎么会内参几乎没有呢!求各位大神求告知如何继续

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qq525566828

禁言 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2017-04-11 11:33:45
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先重复一次观察实验结果是否稳定,然后考虑样品间有什么差异,内参选择是否合适
3楼2017-04-11 16:39:43
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Cruiser肖

金虫 (正式写手)

哪个内参,蛋白浓度多高,抗体效价如何

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4楼2017-04-13 07:19:59
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wjykycg

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

考虑下转膜是否完全,因为转膜BUFFER等因素可能导致部分区域的蛋白未完全转到膜上。
5楼2017-04-14 09:04:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

转膜后的胶染色,看看总蛋白水平。
6楼2017-04-14 10:32:08
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vicky921121

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近我也遇到楼主一样的状况,8个样,已经连续两次了都是最后两个样的GAPDH曝不出来,目的蛋白都有,而且趋势还不错,现在换Actin有条带了,但是偏淡,现打算重提这两个样品蛋白,我感觉可能是总蛋白有问题
WB求助



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7楼2017-04-15 15:27:54
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yss931016

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by vicky921121 at 2017-04-15 15:27:54
最近我也遇到楼主一样的状况,8个样,已经连续两次了都是最后两个样的GAPDH曝不出来,目的蛋白都有,而且趋势还不错,现在换Actin有条带了,但是偏淡,现打算重提这两个样品蛋白,我感觉可能是总蛋白有问题

...

感觉你的转膜有点问题,是湿转还是半干转?

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8楼2017-04-15 16:03:25
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