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疯狂修行者木虫 (正式写手)
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求助：超声波破碎不了
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| 大家好！我在做原核表达，我的蛋白主要在细胞内要通过超声波把细胞破碎释放出蛋白质，前期我的蛋白样品很少用400w的功率超声5s间隔5s就可以把细胞破碎，但是浓度有点小。这次我把样品加大了一倍还用了溶菌酶可是用多大的功率都超不碎了我的样品在四度放了好长时间也不知道有没有问题。到底怎么做才能把样品充分的破碎那？有了解的给我提供点意见吧！做实验做的我好郁闷呀！什么也做不出来！ |
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我们实验市的超破仪也是如此.我也在做原核表达.以前也遇到过此类问题. 第一,你可以把样品分开破碎.多分几管. 第二,原则上是1g菌加入不少于20ml的超破缓冲液. 第三,超破后液体要澄清,虽然不能像LB培养基那么透明但是也要看上去光泽度很好才可以. 第四:增加超破时间. 样品放四度没有问题,我的菌放了个把月照样拿出来做. 溶菌酶就没有必要加了.如果你要做的是蛋白纯化而且目的蛋白是在包含体中的话,建议你超破大致完全以后离心去上清,再加入超破缓冲液继续超破,重复5到8次吧.就可以看到雪白雪白的包含体了  包含体与菌的不同之处在于,包含体容易洗脱,粘性很好,而菌粘度大,还发黄色,肉眼就可辨别. 祝你好运 |
2楼2009-01-02 22:24:12
3楼2009-01-06 23:36:31
4楼2009-01-07 21:25:23
charon1982
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5楼2009-01-07 21:33:17
charon1982
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6楼2009-01-07 21:33:46
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7楼2009-01-08 00:03:20
8楼2009-01-09 18:03:57
9楼2009-01-09 18:05:48
