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mulinxz

新虫 (小有名气)

[求助] 天然质粒DNA提取效率低 已有3人参与

我之前用天根的试剂盒提取率低,怀疑国产的,然后换了omega的,提取效果还是不好,才5ng每微升左右,我已经按照说明书上很细心的做了,都这样!提取的是天然质粒,不是工程质粒,我同学他们提取工程质粒最高达到70,难道是天然质粒和工程质粒的区别吗?我已经考虑到低拷贝的情况了,不知道要怎样才可以达到高浓度,至少20ng以上,要送出测序,华大要求达到一定浓度和纯度,可是怎么搞都不行,求助!!

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蕭堅

新虫 (正式写手)

试剂盒提取DNA损耗挺大的,我在实验室用过几次后就再也没用试剂盒了,试剂盒的EP管中间那个硅胶板其实对DNA有一定的吸附,很大一部分的DNA都在那里残留了,所以损耗很大,楼主还是用碱裂解法吧,经典方法,就是麻烦点

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3楼2017-04-08 11:11:27
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zizi2014

新虫 (小有名气)

浓度低也可以加量做呀,可以先送一份测测看

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4楼2017-04-08 19:17:45
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毛竹0

新虫 (正式写手)

实在不行,可以浓缩一下,我试过冻干RNA样品。

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6楼2017-04-09 15:03:44
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邹忌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以使用一下传统的方法提取一下,我之前做鱼的组织dna提取,用的qiagen的试剂盒就没有传统方法提取的多。另外你最后浓度不高的话,少加点洗脱液,这样浓度会高一些
不是不能,只是不想
7楼2017-04-10 09:46:22
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普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多提几次,然后浓缩不就OK啦

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2楼2017-04-08 08:55:50
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wendy_2002

新虫 (小有名气)

提质粒这个还是要看不同人不同操作的,尤其用试剂盒,每个人提的效果差别大,可以试试让你那个同学做一下。

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5楼2017-04-08 19:27:59
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weebug

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的天然质粒是从哪个环境提取的?比如农药降解菌,就增加菌的数量,然后再提取。
天蓝蓝兮日头晒
8楼2017-04-10 15:13:43
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mulinxz

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by weebug at 2017-04-10 15:13:43
你的天然质粒是从哪个环境提取的?比如农药降解菌,就增加菌的数量,然后再提取。

就是农药降解菌,加倍了也一样呀!

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9楼2017-04-11 13:57:22
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yliu37

新虫 (小有名气)

10楼2017-04-11 17:59:37
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