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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白无法过0.22um的滤膜是怎么回事儿? 已有2人参与

我的菌表达90kd的蛋白,破碎后取包涵体溶解在8m脲中,准备过0.22um的滤膜后用镍柱纯化蛋白,可是蛋白根本无法过滤膜,滴个两三滴就堵了,实验做不下去了,求大神解答。

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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

注意使用的是水膜,另外,这是很正常的情况

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我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
2楼2017-04-06 16:58:36
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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2017-04-06 16:58:36
注意使用的是水膜,另外,这是很正常的情况

买的是密理博的,其他的蛋白都过的挺好的就这个90kd的不行。

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3楼2017-04-06 20:38:00
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很正常吧,12000rmp离心一下再过滤,估计有些不溶性残渣堵了膜了

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4楼2017-04-06 23:53:50
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sy0714541

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
尿素本身就很脏,8M尿素溶液用0.22的水膜过滤本来就很慢,建议你先把尿素溶液过滤,再溶解样品,然后离心再过滤;或溶解样品后然后离心,再过滤

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浦东新区从事生物医药研发,小硕一枚
5楼2017-04-07 08:33:29
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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-06 23:53:50
很正常吧,12000rmp离心一下再过滤,估计有些不溶性残渣堵了膜了

离心之后是容易过滤膜了

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6楼2017-04-19 20:09:31
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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by sy0714541 at 2017-04-07 08:33:29
尿素本身就很脏,8M尿素溶液用0.22的水膜过滤本来就很慢,建议你先把尿素溶液过滤,再溶解样品,然后离心再过滤;或溶解样品后然后离心,再过滤

你的方法不错,谢谢

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7楼2017-04-19 20:09:47
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