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细菌菌液的真空冷冻干燥问题
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培养后的细菌菌液，想要进行真空冷冻干燥以对菌液中的产物进行浓缩。之前一直使用50ml的离心管装大概7ml左右的菌液，上面用封口膜封住，并在封口膜上扎孔，但是遇到两个问题，一个就是干燥24小时也不能干燥完全，而且冷冻的菌液也变成液体无法继续干燥，还有另一个问题是样品容易喷出来。想要求助各位大神，大家一般在做真空冷冻干燥的时候装在什么里面，是怎么处理的？ 发自小木虫Android客户端 |
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我们试验室的冻干操作教程，用西林瓶冻干的，供参考 ------------------------教程开始的分割线----------------------------- 1.瓶子和瓶塞的准备：高度一致（高度不一致导致无法压盖）的西林瓶放在烧杯内，用报纸包好烧杯口，121℃15min灭菌，烘干或放置几天待干燥后使用。二瓣或多瓣的西林瓶瓶塞，在瓶塞中塞上脱脂棉，棉花塞太少，起不到阻隔空气中微生物进入的作用，塞太多棉花，瓶塞难以压入瓶口，这个只能靠练；121℃15min灭菌后，烘干或干燥后使用。 2.菌株的培养：菌株从斜面，活化到平板，观察纯度和生长状态。从活化平板挑取单菌落，接种至液体试管，培养好后，冷藏备用。 3.冻干保护剂：20%脱脂奶（20g奶粉+80g纯水），108℃灭菌15min，杀菌锅压力降至常压后立刻取出（如果在杀菌锅内保温，牛奶会结块）。另一种方式是预先灭菌的三角瓶和瓶塞，加入20%脱脂奶，沸水浴15min或是蒸15min，装牛奶的瓶子和瓶塞一定要接触到高温蒸汽，以减少微生物侵染。脱脂奶少许结块不影响使用，摇匀即可。脱脂奶冷却后尽快使用，未彻底灭菌容易污染微生物，不要放置多天。 4.分装：一个西林瓶加入1ml脱脂奶和1ml菌液（菌液使用前摇匀），用枪头吹打几下混匀，盖上瓶塞，瓶塞不要塞紧，留出水分挥发的空间（从瓶塞瓣之间的缝隙）。瓶身上写上菌株编号。注意更换枪头，不要让带菌的枪头污染未使用的脱脂奶，避免不同菌株混合。分装好的西林瓶建议放入冻干机的铁盘内，方便运送。 5.预冷冻：在分装前应开启低温冰箱使其开始降温，分装一般耗时1~2小时，此时低温冰箱可以达到-40℃左右。将冻干机铁盘放入低温冰箱冷冻。注意铁盘不要直接放在冰箱底面上，应垫个泡沫或纸板等，否则铁盘被冻在冰箱底面上取不下来。在时间安排上，建议上午进行分装，经过一下午的预冻，在下班前1-2小时放入冻干机，并观察冻干机工作情况，利用晚上时间进行冻干。 6.冻干： 检查真空泵中泵油，应在视窗中间左右。 检查密封圈上是否有杂物，有杂物易导致漏气。 先开冷阱，将预冻好的铁盘放在冻干机支架上。支架分三层，底层受冷阱影响大，温度低，最上层受冷阱影响小，温度高，夏季气温高，建议放在底层，冬季温度低，建议放在最上层。在支架和铁盘间放一块圆形纸板或薄的隔热材料，否则铁盘和金属支架直接接触，传热快，铁盘内物料温度迅速升温不利冻干。 如果需要压盖，在不放置物料的支架层也要放置几个瓶子起到支撑作用，否则在压盖时该层会变得很扁，可能导致压盖螺杆长度不足而无法压盖。有机玻璃罩比较沉重，请预先锻炼肌肉。 扣上有机玻璃罩，注意调整有机玻璃罩和密封圈的接触，否则容易漏气。扣好有机玻璃罩后开真空泵，开始冻干。 一般冻干24hr，可以完全干燥。 冻干结束后压盖，关闭冷阱和真空泵，插上放气管放气，气压平衡后拿下有机玻璃罩，取出物料。一般情况下压盖效果都不完全符合要求，需要取出后人工检查并按紧塞子。 |
4楼2017-04-07 10:45:36