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妮妮2017

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳拖带 已有1人参与

我跑的电泳图感觉总是拖带,用的条件是0.8%的琼脂糖凝胶,110V,400MA跑30分钟,求各位大神指点一下

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意孤城_

金虫 (正式写手)

2楼2017-04-05 18:48:50
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哦嗯啊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1:样品浓度过高。这种情况稀释一下就行了。提质粒的时候常出现这种情况。   
2:蛋白杂质阻碍DNA的泳动。提基因组DNA时常出现这种情况。   
以上两种情况,拖尾都是在电泳条带的后面。   
3:样品破碎或是被降解   
4:存在RNA
这两种情况,拖尾都是在电泳条带的前面。   
PCR产物电泳拖尾,主要从以下两个方面考虑:   
1、PCR产物自身原因:
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物过多。 
对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。 2、电泳体系的问题: 
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高。(4)适当把你的胶的浓度加大。(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照。
3楼2017-04-06 22:33:19
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