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酶切后的蛋白 目的蛋白与标签蛋白分离 已有1人参与
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| 大家好，我最近用了镍柱来纯化蛋白，我构建了pet43.1a-scFv-pd1-her2质粒，让其原核表达，然后用镍柱纯化。其中pet43.1a本身表达NUS-his蛋白。我把表达的nus-his-scFv-pd1-her2用凝血酶酶切后，无论是在his柱上切割还是柱下切割 都不能把scFv-pd1-her2和NUS-his进行分开。问题是用10mM咪唑的wash buffer洗的话 scFv-pd1-her2清洗不下来，还在柱上。用20mM咪唑 清洗的话 竟然把NUS-his和scFv-pd1-her2都清洗下来了，我想问问我该怎么办呢？ |
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