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chuxin7072

金虫 (小有名气)

[交流] 细菌破碎问题求助,急

我用的表达菌是大肠杆菌BL21(DE3)PLYS,使用超声波破碎时发现有时很难破碎,而有时却很容易,请问各位碰到过类似的情况吗?原因?
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jasco

木虫 (正式写手)

很难?不会啊。
是不是菌体有自溶,核酸出来会使得菌体变得很黏,但是多超几分钟就好了
2楼2008-12-31 15:57:25
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pinene3862

银虫 (正式写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流,给个红包鼓励一下! 5-29 12:12
加一点溶菌酶,冰上放一会儿。如果粘稠,用benzonase (Novagen)处理一下,很灵的
3楼2008-12-31 18:29:16
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3046261929708

铜虫 (小有名气)

大肠杆菌短小芽孢杆菌也有可能
你若先走了,回头时就不要怪我背对着你!
4楼2008-12-31 20:55:19
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by pinene3862 at 2008-12-31 18:29:
加一点溶菌酶,冰上放一会儿。如果粘稠,用benzonase (Novagen)处理一下,很灵的

加了溶菌酶,是放冰上吗?我们这边都是室温裂解30分钟。
5楼2009-01-01 11:12:02
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流,给个红包鼓励一下! 5-29 12:12
控制菌体生长时间,不要长老了,阴性菌不应该难提的啊,加溶菌酶37度处理,溶菌酶的最适温度是37度,一个小时差不多
帮助虫友,提升自己
6楼2009-01-01 13:38:59
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speculiar

银虫 (小有名气)

我用超声破胞也有类似的情况,所以后来都是用溶菌酶破胞的,保险点
7楼2009-01-01 16:35:54
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youxiaoo

金虫 (初入文坛)

加了溶菌酶,是放冰上吗?我们这边都是室温裂解30分钟。 [/quote]
超声破菌仪
8楼2009-01-03 10:08:25
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youxiaoo

金虫 (初入文坛)

超声破菌,加溶菌酶,并放在冰上
9楼2009-01-03 10:09:24
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baiyidao

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
溶菌酶后放入37后温育1h
10楼2009-05-29 11:27:52
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