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figo.339

木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助】蛋白诱导问题求助

Sample Text
目的基因2800bp，共编码860aa，蛋白分子量97KDa,连接pGEX-4T-1后转化大肠杆菌BL21，Amp+IPTG诱导没有目的蛋白带。
请教各位有做过这么高蛋白分子量的吗？有做过相关的可以说一下吗？谢谢。

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1楼 2008-12-30 14:26:45

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蓝色基因

金虫 (正式写手)

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专业: 环境微生物学

Amp+IPTG过夜诱导的时候，温度不能为37度，控制在16-20度之间比较好。

这是我做实验室得出的一点结论，希望对你有所帮助。

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4楼2009-01-01 11:24:31

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jasco

木虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
figo.339(金币+5,VIP+0):谢谢！
figo.339(金币+3,VIP+0):谢谢！

1.本身蛋白就很大了，加上前面的GST融和蛋白该有120kD了，所以难表达是正常的，建议不接GST

2.分析一下蛋白稀有碱基含量，或者直接转化能表达稀有碱基的rosetta等菌株表达试试

3.低温过夜诱导试试

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2楼2008-12-30 16:54:52

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pinene3862

银虫 (正式写手)

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专业: 植物生理与生化

★ ★
figo.339(金币+2,VIP+0):谢谢

蛋白序列预测有没有N端信号肽？如果有的话，也许要切掉

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3楼2008-12-30 19:28:35

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