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疯狂修行者木虫 (正式写手)
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求助：蛋白纯化方面的知识
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| 大家好我现在正在做蛋白纯化，我的标签上含有6xhis，我用的是GE的蛋白纯化试剂盒，我按照说明书上的说明做的，但是加上结合缓冲液的时候我的靶标蛋白就被洗脱下来了。不知道我的操作上到底出了什么问题？目的蛋白在上样的时候要和柱子亲和多长时间呀？说明书上说要1000rpm,30s可是我都用上1600rpm,10mim了才把它给离下来，接下来我用考马斯亮蓝G250染色法验证我的蛋白在加多少体积的结合缓冲液时可以洗掉杂质，然后加上多大浓度的咪唑缓冲液和多大体积可以把我的目标蛋白给洗脱下来。可是我刚加结合缓冲液的时候目标蛋白就已经下来了其中还含有一些杂蛋白！马上就要毕业了可是论文怎么也做不出来，好上火呀！哪位明白的给我点意见吧，还有在纯化时的一些要点。谢谢了！！！ |
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