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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » JM109DE3在M9培养基上不长是什么原因？已经添加了VB1和氨基酸。
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)

[交流] JM109DE3在M9培养基上不长是什么原因？已经添加了VB1和氨基酸。 已有4人参与

JM109DE3在M9培养基上不长是什么原因？已经添加了VB1和氨基酸。

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1楼 2017-03-28 22:11:59
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)
已经解决，在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢？

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2楼2017-03-30 17:02:07
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安静de执着14

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2楼: Originally posted by 知了啊啊 at 2017-03-30 17:02:07
已经解决，在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢？

请问，你用M9培养的JM109DE3的生长速度达到多少啊？我现在也是用M9培养基培养大肠杆菌，但是生长速度太慢了。
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3楼2017-07-01 20:49:04
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xie99900

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3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2017-07-01 20:49:04
请问，你用M9培养的JM109DE3的生长速度达到多少啊？我现在也是用M9培养基培养大肠杆菌，但是生长速度太慢了。...

KH2PO4            3g
Na2HPO4(12H2O)    17.1g        高压蒸汽灭菌
NaCl               0.5g

MgSO4             1Mm (配20ml 1M储液 过滤除菌 1ml 1M Stock)
Glucose            2g/L  (20℃溶解度为83g/100ml H2O, 储液配成40g/50ml,过滤除菌，使用时每升加2.5ml 葡萄糖储液)
15NH4Cl            1g /L
请问你用的培养基配方是这样的吗？
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4楼2017-11-27 15:18:42
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铮铮泽泽

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4楼: Originally posted by xie99900 at 2017-11-27 15:18:42
KH2PO4            3g
Na2HPO4(12H2O)    17.1g        高压蒸汽灭菌
NaCl               0.5g

MgSO4             1Mm (配20ml 1M储液 过滤除菌 1ml 1M Stock)
Glucose            2g/L  (20℃溶解度为83g/1 ...

葡萄糖有点不一样，是先配成20%的溶液抽滤，然后配成一升的时候加2毫升。其他都差不多，我的用M9培养基挑JM109单克隆，也是很慢。48h左右才出斑，而且基本上也长不大了。
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5楼2017-11-30 15:57:24
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铮铮泽泽

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2楼: Originally posted by 知了啊啊 at 2017-03-30 17:02:07
已经解决，在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢？

请问楼主，我用M9就是挑选出能自己合成脯氨酸的单菌落，但克隆长的太慢，怎样添加氨基酸和维生素呢？脯氨酸肯定不能加，那加什么氨基酸呢？
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6楼2017-11-30 16:03:12
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知了啊啊

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3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2017-07-01 20:49:04
请问，你用M9培养的JM109DE3的生长速度达到多少啊？我现在也是用M9培养基培养大肠杆菌，但是生长速度太慢了。...

基本上6个小时才能生长到0.8
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7楼2018-03-29 16:35:54
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知了啊啊

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4楼: Originally posted by xie99900 at 2017-11-27 15:18:42
KH2PO4            3g
Na2HPO4(12H2O)    17.1g        高压蒸汽灭菌
NaCl               0.5g

MgSO4             1Mm (配20ml 1M储液 过滤除菌 1ml 1M Stock)
Glucose            2g/L  (20℃溶解度为83g/1 ...

我用的事额外添加VB1和一缺氨基酸的。
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8楼2018-03-29 16:36:36
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by 铮铮泽泽 at 2017-11-30 16:03:12
请问楼主，我用M9就是挑选出能自己合成脯氨酸的单菌落，但克隆长的太慢，怎样添加氨基酸和维生素呢？脯氨酸肯定不能加，那加什么氨基酸呢？...

你可以找一找缺少脯氨酸的氨基酸复合物，一般做酵母的都会用一缺氨基酸，很好找。
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9楼2018-03-29 16:37:49
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swgcpy

至尊木虫 (著名写手)
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2楼: Originally posted by 知了啊啊 at 2017-03-30 17:02:07
已经解决，在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢？

楼主你好，请问你是摇瓶表达的吗，脯氨酸的添加量大概是多少，谢谢！
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10楼2019-02-26 10:05:59
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