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知了啊啊

新虫 (初入文坛)

[交流] JM109DE3在M9培养基上不长是什么原因?已经添加了VB1和氨基酸。 已有4人参与

JM109DE3在M9培养基上不长是什么原因?已经添加了VB1和氨基酸。

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知了啊啊

新虫 (初入文坛)

已经解决,在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢?

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2楼2017-03-30 17:02:07
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安静de执着14

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2楼: Originally posted by 知了啊啊 at 2017-03-30 17:02:07
已经解决,在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢?

请问,你用M9培养的JM109DE3的生长速度达到多少啊?我现在也是用M9培养基培养大肠杆菌,但是生长速度太慢了。
3楼2017-07-01 20:49:04
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xie99900

新虫 (初入文坛)


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3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2017-07-01 20:49:04
请问,你用M9培养的JM109DE3的生长速度达到多少啊?我现在也是用M9培养基培养大肠杆菌,但是生长速度太慢了。...

KH2PO4            3g
Na2HPO4(12H2O)    17.1g        高压蒸汽灭菌
NaCl               0.5g

MgSO4             1Mm (配20ml 1M储液 过滤除菌 1ml 1M Stock)
Glucose            2g/L  (20℃溶解度为83g/100ml H2O, 储液配成40g/50ml,过滤除菌,使用时每升加2.5ml 葡萄糖储液)
15NH4Cl            1g /L
请问你用的培养基配方是这样的吗?
4楼2017-11-27 15:18:42
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铮铮泽泽

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4楼: Originally posted by xie99900 at 2017-11-27 15:18:42
KH2PO4            3g
Na2HPO4(12H2O)    17.1g        高压蒸汽灭菌
NaCl               0.5g

MgSO4             1Mm (配20ml 1M储液 过滤除菌 1ml 1M Stock)
Glucose            2g/L  (20℃溶解度为83g/1 ...

葡萄糖有点不一样,是先配成20%的溶液抽滤,然后配成一升的时候加2毫升。其他都差不多,我的用M9培养基挑JM109单克隆,也是很慢。48h左右才出斑,而且基本上也长不大了。
5楼2017-11-30 15:57:24
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铮铮泽泽

新虫 (初入文坛)


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2楼: Originally posted by 知了啊啊 at 2017-03-30 17:02:07
已经解决,在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢?

请问楼主,我用M9就是挑选出能自己合成脯氨酸的单菌落,但克隆长的太慢,怎样添加氨基酸和维生素呢?脯氨酸肯定不能加,那加什么氨基酸呢?
6楼2017-11-30 16:03:12
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2017-07-01 20:49:04
请问,你用M9培养的JM109DE3的生长速度达到多少啊?我现在也是用M9培养基培养大肠杆菌,但是生长速度太慢了。...

基本上6个小时才能生长到0.8
7楼2018-03-29 16:35:54
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by xie99900 at 2017-11-27 15:18:42
KH2PO4            3g
Na2HPO4(12H2O)    17.1g        高压蒸汽灭菌
NaCl               0.5g

MgSO4             1Mm (配20ml 1M储液 过滤除菌 1ml 1M Stock)
Glucose            2g/L  (20℃溶解度为83g/1 ...

我用的事额外添加VB1和一缺氨基酸的。
8楼2018-03-29 16:36:36
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by 铮铮泽泽 at 2017-11-30 16:03:12
请问楼主,我用M9就是挑选出能自己合成脯氨酸的单菌落,但克隆长的太慢,怎样添加氨基酸和维生素呢?脯氨酸肯定不能加,那加什么氨基酸呢?...

你可以找一找缺少脯氨酸的氨基酸复合物,一般做酵母的都会用一缺氨基酸,很好找。
9楼2018-03-29 16:37:49
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swgcpy

至尊木虫 (著名写手)


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2楼: Originally posted by 知了啊啊 at 2017-03-30 17:02:07
已经解决,在培养基中添加了L.脯氨酸。但是生长的还是有点慢?

楼主你好,请问你是摇瓶表达的吗,脯氨酸的添加量大概是多少,谢谢!
10楼2019-02-26 10:05:59
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