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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请教：脂肪组织RNA提取怎么样提高得率和质量？
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紫之念_Ivy

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教：脂肪组织RNA提取怎么样提高得率和质量？ 已有6人参与

脂肪组织RNA提取，采用柱式提取法（天根动物组织总RNA提取法），按照文献中的改进方法将样品量提高到了150mg，但是最后提取得到的RNA浓度依旧很低，电泳都跑不出来条带。其中操作步骤中加完裂解液离心后怎么样弃去油脂层？同时求推荐脂肪组织RNA提取高效的方法或试剂盒，谢谢！
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1楼 2017-03-27 21:07:29
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释然Ooo

新虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-30 22:40:48
我们用trizol法提，首先加trizol和钢珠，打碎组织后离心离心，将上层油脂吸走，再做后边的步骤

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3楼2017-03-28 09:53:17
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lvlei25

禁虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 屏蔽内容, 禁止发布商业性回帖 2017-03-30 22:41:16
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2楼2017-03-28 09:31:28
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紫之念_Ivy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 释然Ooo at 2017-03-28 09:53:17
我们用trizol法提，首先加trizol和钢珠，打碎组织后离心离心，将上层油脂吸走，再做后边的步骤

能具体讲讲怎么吸走上层油脂吗？我尝试过，好像很难吸，而且很容易将下面的清液吸走。
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4楼2017-03-30 16:02:40
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释然Ooo

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 紫之念_Ivy at 2017-03-30 16:02:40
能具体讲讲怎么吸走上层油脂吗？我尝试过，好像很难吸，而且很容易将下面的清液吸走。...

用枪吸就可以，把大部分油脂吸掉

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5楼2017-03-30 16:11:40
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紫之念_Ivy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 释然Ooo at 2017-03-30 16:11:40
用枪吸就可以，把大部分油脂吸掉
...

今天试了一下，枪头直接穿过油层吸取清液，提出来的RNA浓度和纯度都还可以，可是电泳跑的好像不太对，能帮忙看看吗？
请教：脂肪组织RNA提取怎么样提高得率和质量？
IMG_6957.JPG
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6楼2017-03-30 19:55:14
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臭皮匠

新虫 (初入文坛)
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有种试剂盒 Trizol+柱子 高纯度RNA提取试剂盒 做的样品量大
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7楼2017-03-30 20:55:00
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紫之念_Ivy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 臭皮匠 at 2017-03-30 20:55:00
有种试剂盒 Trizol+柱子 高纯度RNA提取试剂盒 做的样品量大

我用的是天根的柱式提取，通过增加取样量和研磨力度，还有就是低温离心，效果有所提高。上次提取的RNA浓度低了一点，电影图如图1，最近一次浓度提高不少但是好像降解了，如图2。是不是降解了呀？还能往下做反转录和PCR吗？
请教：脂肪组织RNA提取怎么样提高得率和质量？-1


请教：脂肪组织RNA提取怎么样提高得率和质量？-2



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8楼2017-03-31 00:08:32
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伊巴代提

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 紫之念_Ivy at 2017-03-31 00:08:32
我用的是天根的柱式提取，通过增加取样量和研磨力度，还有就是低温离心，效果有所提高。上次提取的RNA浓度低了一点，电影图如图1，最近一次浓度提高不少但是好像降解了，如图2。是不是降解了呀？还能往下做反转录和 ...

应该是降解了。

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9楼2017-03-31 07:45:13
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 紫之念_Ivy at 2017-03-30 22:55:14
今天试了一下，枪头直接穿过油层吸取清液，提出来的RNA浓度和纯度都还可以，可是电泳跑的好像不太对，能帮忙看看吗？

IMG_6957.JPG
...

应该是有DNA污染吧

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10楼2017-03-31 21:58:21
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