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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物作为模板再进行PCR时的问题
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playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] PCR产物作为模板再进行PCR时的问题

各位虫友请教一个问题：
用PCR产物作为模板再进行PCR时有什么需要注意的吗？
我将第一次PCR的产物作为模板进行第二次扩增时可以扩出带来   可是那第二次PCR产物作为模板进行第三次扩增时却只有smear    理论上不会出现这种状况啊      大家有做过的吗   请高手指教一下（几次扩增的条件都是一样的    模板量就是取上次PCR产物1微升作为模板）

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-22 at 15:50 ]
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1楼 2008-12-29 15:17:23
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来！
(1)PCR产物要电泳回收,否则小分子的非特异产物将在下一次扩增中成为优势产物
(2)模板用量太大了
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2楼2008-12-29 19:24:34
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xtmgah31

银虫 (小有名气)
没回收也可以，可能是模板量太大了
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3楼2009-01-14 16:04:41
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
稀释很多倍哦。没做过
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4楼2009-01-14 17:04:42
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
一般小片段第一次扩增出来，第二次如果再以它为模板就很困难克隆出来，具体原因部不好解释，可能是小片段比较容易降解吧？有时候叫胶回收的条带也是会容易出现这种情况。
也许是和模板量有关？不太好说
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2009-01-15 04:15:25
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speculiar

银虫 (小有名气)
模板要稀释的
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6楼2009-01-15 10:25:17
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
你好，我是刚开始接触这方面的实验，想请教一下为什么要以PCR产物为模板继续进行PCR，可以提高扩增产物特异性吗？
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7楼2009-01-15 20:41:51
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