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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr敲基因遇到问题，急求大神支招！！
汕头大学海洋科学接受调剂
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defte

新虫 (小有名气)

[求助] crispr敲基因遇到问题，急求大神支招！！ 已有1人参与

用crispr最近敲了一次，菌落pcr的时候有些有2条带，我就挑菌养了，制成DNA粗提液后再用primestar的酶pcr验证了一次，结果就成了全部没敲掉的样子了。

crispr敲基因遇到问题，急求大神支招！！


crispr敲基因遇到问题，急求大神支招！！-1


@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-03-24 14:40:46
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411的虫虫

新虫 (初入文坛)
求助怎么敲基因呢？谢谢

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2楼2017-03-24 16:24:52
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草溪河

铁虫 (著名写手)
不清楚你是编辑一个位点，还是设计了两个位点sgRNA将目的片段删除。

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3楼2017-03-25 08:15:42
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defte

新虫 (小有名气)
一个位点

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4楼2017-03-28 16:00:32
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Yang2222dan

新虫 (正式写手)
请问你的引物是怎么设计的

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5楼2017-03-31 21:17:04
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kissmet

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你敲出的是什么细胞的？ 如果是双倍体的话 你得两条染色体上的都敲掉的。如果是双倍体的话，你筛选出来的细胞很有可能只敲掉了一条上的。。
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6楼2017-04-01 09:11:06
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defte

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Yang2222dan at 2017-03-31 21:17:04
请问你的引物是怎么设计的

上下游对接

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7楼2017-04-06 10:46:34
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defte

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kissmet at 2017-04-01 09:11:06
你敲出的是什么细胞的？ 如果是双倍体的话 你得两条染色体上的都敲掉的。如果是双倍体的话，你筛选出来的细胞很有可能只敲掉了一条上的。。

大肠杆菌，问了师姐，师姐也不知道怎么解释

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8楼2017-04-06 10:47:20
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defte

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 草溪河 at 2017-03-25 08:15:42
不清楚你是编辑一个位点，还是设计了两个位点sgRNA将目的片段删除。

一个位点

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9楼2017-04-06 10:47:37
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defte

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 411的虫虫 at 2017-03-24 16:24:52
求助怎么敲基因呢？谢谢

用的crispr

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10楼2017-04-06 10:47:56
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