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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] 我的PCR为什么没有带

请各位帮我看看我的 RAPD PCR为什么会出现这用情况
第一孔为Marker,2,3孔为一个引物对两个样品的PCR;4,5孔为第二个引物对两个样品的PCR,依次类推

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-24 at 09:48 ]
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

我的反应体系是20ul ,96度5分;94度50秒,36度,45秒,72度90秒,39次循环,72度,5分
2楼2008-12-28 18:52:30
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~3Q~~
一种情况:RAPD本来就需要筛选出能扩出条带的引物
建议继续试一下别的引物

另一种情况:
36度,45秒
退火温度比较低哦
非特异性扩增比较多
不知道你的退火温度是怎么定的
建议摸索一下退火温度
3楼2008-12-28 20:04:33
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bone0611

模板浓度摸索过吗?
4楼2008-12-28 21:20:17
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figo.339

木虫 (著名写手)

你的退火温度太低了啊,不过看第2和第6孔有带,感觉引物应该没问题,还有35个cycles足矣。
5楼2008-12-28 22:21:35
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

退货温度应该在55度左右
会当凌绝顶,一览众山小
6楼2008-12-28 23:36:46
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