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嘉笛

木虫 (小有名气)

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[交流] 毕赤酵母分泌表达时表达量降低？

最近做毕赤酵母分泌表达抑肽酶（一种胰蛋白酶抑制剂），用胰蛋白酶测定活性，发现12到24小时活性最大（A直达最小），其后随时间延长活性降低（A值增大），（因为设计的是分泌表达，只测了培养基上清）。按说抑肽酶本身为蛋白酶抑制剂，不应该被其他蛋白水解啊，真是百思不得其解啊，还望高手帮忙，不胜感激！！！

另附抑肽酶活性测定方法如下：
将胰酶标准品配成1mg/ml的溶液，在2ml的反应缓冲液中加入20μl、40μl、60μl、80μl、100μl胰酶标准液以及80μl、60μl、40μl、20μl、0μl的重蒸水,在25℃水浴中预热15min后，加入1ml已预热的 2mM N-苯甲酰-L-精氨酸-β-萘酰胺(BAPNA)溶液，25℃水浴中准确计时5min，加入1ml 60%冰醋酸终止反应，测量A410。画出标准曲线，并计算得回归方程。
同上法在2ml的反应缓冲液中加入80μl胰酶标准液以及20μl的待测溶液，置于25℃水浴中保温15 min，加入1 ml底物N-苯甲酰-L-精氨酸-β-萘酰胺(BAPNA)，确计时5 min后，入1 ml 60%冰乙酸终止反应，测量A410。如未处于线形范围内，则将待测溶液稀释重测，直至测量值位于线形范围内。根据回归方程计算得胰酶标准液的表观体积，按照如下方程计算抑肽酶的含量。
抑肽酶活性单位（TIU/ml）= 0.0767*（80-胰酶标准液的表观体积）* 稀释倍数

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