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Dreamt小龟z

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR一直扩增不出目的条带怎么办?已有6人参与

PCR一直扩增不出目的条带,全是引物二聚体,做了梯度PCR也还都是引物二聚体,还有可能是哪方面的原因啊,求大神指导。嘤嘤嘤
师兄说目的条带不大,大概300bp左右,但是我出来的条带明显不是。
下图是梯度的结果,引物是从文献里找的。新手求指导啊,嘤嘤嘤

PCR一直扩增不出目的条带怎么办?@biostar2009
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可爱范儿二

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-24 07:49:58
首先确定两条引物的Tm值相差几度(超过5度PCR较困难),如果Tm值相差超过10度,使用高保真酶就不行了,一般用Kod。
25楼2017-03-23 11:28:05
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查看全部 34 个回答

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物如果是文献里的,不至于p不出来~你的模板没有问题吗?
···
2楼2017-03-20 20:12:33
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Hey Daring

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-21 07:47:00
阴物问题 不一定文献里面的你可以适用 有时候环境不一样了 确实出不来 看看能不能自己设计引物

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-20 20:32:55
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snowjiao0202

新虫 (初入文坛)

考虑下模板的纯度和浓度 换换体系和酶也可以试试啊

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-20 21:03:01
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