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遇到很棘手的问题,请酵母双杂交的高手赐教!!! 已有4人参与
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让Takara公司给建了个Y2H文库,用的是Clontech的体系,实验室很多人用不同的bait筛库,结果做验证时发现几乎90%的prey都能与空的pGBKT7在三缺、四缺、四缺+3AT,四缺+x-a-gal的板上长。筛库前做过自激活验证,都没有自激活活性,共转化AD和BD,BD和pGADT7-L以及单转BD涂到三缺、四缺、四缺+3AT和四缺+x-a-gal板都不会长,说明空载体 没有问题,平板也没有问题。可是为什么全是prey与空BD互作呢?请问这种情况该怎么办呢?![]() :cry |
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Neo2000
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