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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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winding1136

银虫 (正式写手)

[交流] 一个关于农杆菌菌液PCR的问题

农杆菌是感受态转化后摇出来的,摇了大概15个小时,有点浓,PCR之后什么条带都没有,用的是来P启动子和目的基因的两对引物,转化前的大肠杆菌质粒能P的出来,转化后却P不出来,作过2次转化了,P过7.8次都没有,有谁有类似经验的吗?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

菌液加少点,1ul可能都多了,摇过度可能培养基含有一些能够抑制PCR反应的副产物
然后预变性的时间长一点,比如94℃,10min
然后退火温度再降1度看看
还有,用的是什么Taq酶
我用Promega的GoTaq还没遇到扩不出来的
2楼2008-12-26 10:33:20
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

我也遇到类似的情况,不知道为什么没有转进去,最后只有不停的重做了
3楼2008-12-26 18:19:05
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