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克隆做起来总是很吃力是为什么 已有1人参与
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最近克隆做的很不顺利，之前几乎都是一次就可以成功，现在很多克隆做了很多次都不成功。说说最近做过的克隆： 1. PCR一个异源酶到载体上，做出来发现大小小了300多。重新做了几次发现虽然大小对了，测序测不出来，只有前100多个可以测出来，后面都是乱的。再后来我把这个酶从这个载体换到另一个上面才测序成功。 2. 一套大致相似的4个载体，同时插入一个酶，同时操作。有三个都成功了，只有最后一个虽然长了菌落但是无法在抗生素中生长，其他三个正确率都有百分之80以上，只有最后这个后面也没法再做出来了。载体区别只有启动子强度。没做出来的最强，不知道有没有关系。 3. 克隆一个有毒的基因在一个组成行的启动子后面，做了三个月没有进展，交给公司合成了。 自我感觉自从我们换了一套胶回收提质粒的kits，一直不太好。之前用omega现在有zymo什么的，问题在于每次做都不知道为什么成功或失败，也没有办法重复。经常会长一些杂菌，能提出质粒，不过酶切验证完全切不开，我都不知道是什么。 |
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