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Tet-on表达调控系统
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1992年Goseen等人成功的利用原核基因调控元件构建了四环素（tetracycline,Tet）真核细胞基因调控表达系统。目前，此系统已被广泛应用于基因功能和基因治疗领域的研究。 1、四环素调控表达系统的基本原理 Tet调控表达系统通过诱导药物（如Tet）改变调控蛋白的构象，从而达到调控目标蛋白表达的目的。 最初的Tet调控基因表达系统是以大肠杆菌Tn10转座子上Tet抗性操纵子为基础而建立的。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）与Tet操纵子（Tet operator, TetO）能够特异性结合。当细胞内无Tet存在时，Tet会与TetO结合，从而阻断下游抗性基因表达；当有Tet存在时，Tet使TetR构象发生改变，导致TetR与TetO分离，使下游抗性基因得以表达，细菌从而获得耐药性  2、Tet-on调控系统 利用TetR和TetO特异性结合的特点，多种类型的Tet调控系统逐渐发展起来。根据应用最为广泛的是Tet-on激活型系统。 Tet-on系统由调节表达载体和反应表达载体组成。 调节表达载体包含一个人巨细胞病毒早期启动子（PhCMV）和反义Tet转录活化因子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其中rtTA由反义TetR（reverse TetR, rTetR）和单纯疱疹病毒（HSV）VP16蛋白C端的一段转录激活区域融合而成。 反应表达载体由Tet应答元件（Tet-responsive element, TRE）、最小CMV启动子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目的基因组成。其中TRE是7个重复的TetO序列。 由于PminCMV缺少增强子，因此rtTA未与TRE结合时，目的基因不表达；当rtTA与TRE结合时，VP16会使PminCMV活化从而使基因表达。 在Dox不存在时，rTetR不能与TRE结合，导致基因表达被抑制；而当Dox存在时，rTetR能与TRE结合，进而使得目的基因表达。  3、Tet-on调控系统的优势 Tet-on调控系统集高效率、精准、安全、可逆性四大特点。 维真可为您提供腺病毒、慢病毒、腺相关病毒和四环素调控表达载体，还提供病毒包装服务。  |
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