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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助蛋白电泳】请大家看看我跑的SDS-PAGE蛋白电泳图
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小瓜子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by swjs37sunwei at 2017-03-14 11:26:04
跑出来的胶呈弥散最主要应该是胶制的不好，重新换块胶试试；
另外如果样品是细胞裂解总蛋白加loading煮沸后最好短暂离心后再上样（13000rpm 2min）；
还有一点如果想胶跑出来的好看尽量用低电压去跑。

恩恩好的，我再试试~~
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11楼2017-03-14 16:18:24
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小瓜子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞翔的吉大人 at 2017-03-14 14:07:27
Marker跑的挺好的，说明胶问题不大，跑蛋白电泳要注意样品离子浓度不要太大，浓缩胶低电压一般70，分离胶适当提高一些，我一般是110V，全程低温加冰，多多的冰

我为了跑得快用120V跑的，因为是成品胶，所以全程没变电压。。。TT
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12楼2017-03-14 16:20:38
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小瓜子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 陪你砸流星 at 2017-03-14 14:13:16
跑一个双向电泳试试，你的样品不纯

嗯是啊，我现在才知道要离心以后再上样，煮完就直接上样了T-T，我重做试试
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13楼2017-03-14 16:23:23
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sensen924

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小瓜子 at 2017-03-14 09:13:56
第一次做也不知道要离心T_T
煮完之后离心吗？那大约多少转，离心多久啊？会把蛋白离心到沉淀里面吗？...

最好是重提蛋白，谨慎操做。要是样品难弄到，你试试500转，1～2分钟。只是推测，希望能给你提供个参考。加油

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愿一切有缘人平安幸福
14楼2017-03-14 20:03:05
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prthefu

木虫 (著名写手)
看整体的情况，是配胶有问题，建议自己配胶，然后充分混匀。再次，就是你说的竖线问题，这个你可以在煮沸样品后稍加离心，然后取上清进行电泳试试。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
15楼2017-03-14 22:54:57
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小瓜子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by sensen924 at 2017-03-14 20:03:05
最好是重提蛋白，谨慎操做。要是样品难弄到，你试试500转，1～2分钟。只是推测，希望能给你提供个参考。加油
...

恩恩，我有菌液，重新摇菌重新诱导表达蛋白跑胶就行，另外还有就是我只是小提蛋白检测一下摸摸表达情况，那在煮沸之前还需要超声破菌吗？
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16楼2017-03-15 20:03:53
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冰之雪域

新虫 (小有名气)
从maker看，胶是没有问题的。如果是总蛋白，最好在样品煮后，离心一下，取上清去跑胶

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17楼2017-03-15 21:53:12
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siyuyouai

银虫 (小有名气)
你煮完样之后上样是不是感觉样品有点黏黏的？如果是那就是核酸，加点核酸酶（？）进去降解一下就好了，我也跑出来过这种屎一样的电泳，哈哈
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18楼2017-03-16 09:33:17
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siyuyouai

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小瓜子 at 2017-03-15 20:03:53
恩恩，我有菌液，重新摇菌重新诱导表达蛋白跑胶就行，另外还有就是我只是小提蛋白检测一下摸摸表达情况，那在煮沸之前还需要超声破菌吗？...

不需要，但是就是因为不超声，所以细菌里边的核酸还在，就有可能出现你现在跑胶的情况
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19楼2017-03-16 09:36:01
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小瓜子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by siyuyouai at 2017-03-16 09:33:17
你煮完样之后上样是不是感觉样品有点黏黏的？如果是那就是核酸，加点核酸酶（？）进去降解一下就好了，我也跑出来过这种屎一样的电泳，哈哈

是呀，黏黏的，不太好吸取上来，用了好几种离心方法，后来觉得12000rpm，离心了5分钟，吸上清就好多了。
加核酸酶什么的应该就不用了吧。。。
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20楼2017-03-16 10:33:05
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