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小瓜子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by swjs37sunwei at 2017-03-14 11:26:04
跑出来的胶呈弥散最主要应该是胶制的不好,重新换块胶试试;
另外如果样品是细胞裂解总蛋白加loading煮沸后最好短暂离心后再上样(13000rpm 2min);
还有一点如果想胶跑出来的好看尽量用低电压去跑。

恩恩好的,我再试试~~
11楼2017-03-14 16:18:24
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小瓜子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞翔的吉大人 at 2017-03-14 14:07:27
Marker跑的挺好的,说明胶问题不大,跑蛋白电泳要注意样品离子浓度不要太大,浓缩胶低电压一般70,分离胶适当提高一些,我一般是110V,全程低温加冰,多多的冰

我为了跑得快用120V跑的,因为是成品胶,所以全程没变电压。。。TT
12楼2017-03-14 16:20:38
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小瓜子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 陪你砸流星 at 2017-03-14 14:13:16
跑一个双向电泳试试,你的样品不纯

嗯是啊,我现在才知道要离心以后再上样,煮完就直接上样了T-T,我重做试试
13楼2017-03-14 16:23:23
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sensen924

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小瓜子 at 2017-03-14 09:13:56
第一次做也不知道要离心T_T
煮完之后离心吗?那大约多少转,离心多久啊?会把蛋白离心到沉淀里面吗?...

最好是重提蛋白,谨慎操做。要是样品难弄到,你试试500转,1~2分钟。只是推测,希望能给你提供个参考。加油

发自小木虫Android客户端
愿一切有缘人平安幸福
14楼2017-03-14 20:03:05
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prthefu

木虫 (著名写手)

看整体的情况,是配胶有问题,建议自己配胶,然后充分混匀。再次,就是你说的竖线问题,这个你可以在煮沸样品后稍加离心,然后取上清进行电泳试试。
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
15楼2017-03-14 22:54:57
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小瓜子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by sensen924 at 2017-03-14 20:03:05
最好是重提蛋白,谨慎操做。要是样品难弄到,你试试500转,1~2分钟。只是推测,希望能给你提供个参考。加油
...

恩恩,我有菌液,重新摇菌重新诱导表达蛋白跑胶就行,另外还有就是我只是小提蛋白检测一下摸摸表达情况,那在煮沸之前还需要超声破菌吗?
16楼2017-03-15 20:03:53
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冰之雪域

新虫 (小有名气)

从maker看,胶是没有问题的。如果是总蛋白,最好在样品煮后,离心一下,取上清去跑胶

发自小木虫IOS客户端
17楼2017-03-15 21:53:12
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siyuyouai

银虫 (小有名气)

你煮完样之后上样是不是感觉样品有点黏黏的?如果是那就是核酸,加点核酸酶(?)进去降解一下就好了,我也跑出来过这种屎一样的电泳,哈哈
18楼2017-03-16 09:33:17
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siyuyouai

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小瓜子 at 2017-03-15 20:03:53
恩恩,我有菌液,重新摇菌重新诱导表达蛋白跑胶就行,另外还有就是我只是小提蛋白检测一下摸摸表达情况,那在煮沸之前还需要超声破菌吗?...

不需要,但是就是因为不超声,所以细菌里边的核酸还在,就有可能出现你现在跑胶的情况
19楼2017-03-16 09:36:01
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小瓜子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by siyuyouai at 2017-03-16 09:33:17
你煮完样之后上样是不是感觉样品有点黏黏的?如果是那就是核酸,加点核酸酶(?)进去降解一下就好了,我也跑出来过这种屎一样的电泳,哈哈

是呀,黏黏的,不太好吸取上来,用了好几种离心方法,后来觉得12000rpm,离心了5分钟,吸上清就好多了。
加核酸酶什么的应该就不用了吧。。。
20楼2017-03-16 10:33:05
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