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waiting9992

新虫 (初入文坛)

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[求助] 在上海细胞库订购了一株RAW264.7细胞，想请教一下拿到细胞库的细胞后怎样处理？已有2人参与

在上海细胞库订购了一株RAW264.7细胞，想请教一下拿到细胞库的细胞后怎样处理？
查到的大概处理步骤是：
1.先观察细胞瓶身是否完好有无污染，若无，显微镜下根据细胞状态进行后续操作
2.如果没长满，留一部分原培养基在加一点自己的培养基继续培养，留一部分原培养基于冰箱中保存，目的是采用循序渐进更换培养基的原则，直至全部换成自己的培养基，使细胞有一个适应的过程
3.如果长满就进行传代，一般是一扩二
问题：
1.今天收到细胞库的邮件上面写着培养瓶内的老培养液没有加双抗，且不能重复使用，那原培养基有留的必要吗，直接加自己的培养基可以吗？
2.因为RAW264.7细胞容易分化，有养过这个细胞的前辈建议不要用胰酶消化，当细胞长至60-70%直接用培养基吹，想请教一下各位大神，这样操作的话这个细胞好吹打下来吗，会不会有很多细胞吹打不下来浪费掉，传代的时候不用长满就可以吹打，但是冻存的话是不是应该长满在进行处理，那样的话是不是更不容易吹打下来？
3.复苏时，DMSO对这个细胞影响是否敏感，可不可以复苏溶解后不离心直接加完全培养基进行培养，第二天在进行换液，减少离心对细胞的破坏，不知是否可行？
4.各位大神培养这个细胞有什么注意事项和小窍门吗？

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