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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » dATP在T4连接中的作用
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c8899747

新虫 (初入文坛)

[交流] dATP在T4连接中的作用 已有2人参与

最近做T4连接，检测出来的全部都是空载，把酶之类的都验证了，发现都没有问题，唯一的就是T4处理过程中的dATP了，想问问dATP在这个过程中的作用，非常感谢

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1楼 2017-03-12 19:43:58
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nbu-zww

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
T4处理完了要做Dna回收，直接用的话载体也被磷酸化了，载体自链接了。另外，载体酶切完了要ciap

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2楼2017-03-12 21:11:58
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c8899747

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nbu-zww at 2017-03-12 21:11:58
T4处理完了要做Dna回收，直接用的话载体也被磷酸化了，载体自链接了。另外，载体酶切完了要ciap

T4处理完后做过回收，以前一直都是用T4的方法做连接，这次突然出现这种状况，很头疼，把所有的酶都做验证了，都没有问题，就剩下dATP没有验证了，准备做dATP的验证。因为我是觉得如果dATP降解了应该不会有阳性克隆纯在，虽然说大批载体自连，但是偶尔有个别的阳性。

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3楼2017-03-12 22:44:13
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是ATP不是dATP。ATP提供能量。缓冲液放久了，加点ATP可以提高酶催化连接的能力。
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为什么
4楼2017-03-13 16:02:41
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