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往阳光多处走

新虫 (小有名气)

[求助] 高保真酶怎么就跑不出呢 已有4人参与

我想问一下，我条带700左右，跑PCR ，普通的Taq 酶可以跑出条带，可是用高保真酶(宝生物)的就是跑不出来，也跑过梯度PCR ，也用普通酶跑去测过序，只是500多的时候突变成了终止密码止，这个证明了我引物是不错的，因为前面的序列比对都是对的。我想问一下，到底是哪里出了问题，让我跑了好几个月都没跑出来的原因。

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-03-10 15:10:23
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bbass533

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2017-03-10 15:49:55
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有的高保真就不怎么样。推荐一款primestar gxl的，很给力。还有一个办法，用普通taq做五个独立反应，跑20个左右的cycle，全测序，运气好的话，可能有没突变的。之前我也成功过

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2017-03-10 16:17:12
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Pfu的扩增效率明显不如Taq，好多高保真酶也来自Pfu。
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4楼2017-03-10 23:06:59
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Yomi0407

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 往阳光多处走 at 2017-03-10 15:10:23
我想问一下，我条带700左右，跑PCR ，普通的Taq 酶可以跑出条带，可是用高保真酶(宝生物)的就是跑不出来，也跑过梯度PCR ，也用普通酶跑去测过序，只是500多的时候突变成了终止密码止，这个证明了我引物是不错的，因 ...

你好，我现在也遇到了和你一样的问题想问一下你现在有解决方法了吗

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5楼2017-08-31 19:17:07
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向阳向蕊

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你仔细看看说明书，是不是需要热启动。
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吃亏是福，难得糊涂
6楼2017-09-01 15:13:00
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