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善良的BL21

新虫 (小有名气)


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重力柱纯化后保存一天变性了 都是沉淀
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利用高密度发酵进行蛋白表达,重力柱纯化,可是放-80一天后,蛋白发生了变性,都成了沉淀,酶活也没有了。另外,由于菌体较多,我用了四天半才纯完,每天纯完的蛋白用冰盒放4°冰箱保存,全部弄完后才分装放在-80。难道是这几天放4°冰箱造成的?请教一下,多谢帮助。

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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
冻酶可以加少量甘油,防止蛋白变性失活
15楼2017-03-08 00:07:14
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medi812

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
-80下蛋白很容易出现cold denature 你如果就用你纯化后的溶液 里面的盐在冰冻的过程中会瞬间浓缩几十倍 蛋白很有可能失活
你要保存蛋白 一方面要维持pH 同时盐度也很重要 楼上说甘油就不错,或者你也可以试试其他的盐 比如Histidine/His-Hcl 既能控制pH,又能保护蛋白 再加甘油 (或者再额外加少量的PS80) 应该可以稳定蛋白
16楼2017-03-27 04:31:15
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2017-03-07 19:26   回复  
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buaa_hw3楼
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yiyilan6楼
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qqyang110412楼
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xywlovesyt14楼
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