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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物电泳呈M型咋回事？
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] PCR产物电泳呈M型咋回事？

本人最近做RAPD，PCR产物电泳图呈波浪M型而不是一直线怎么回事？随机引物很少扩增出接过来，在94度变性没有任何条带后来96度变性有个别条带（温度高不高啊？）我的体系有没有问题

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:23 ]
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1楼 2008-12-22 10:31:15
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donna181

金虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-22 13:12
PCR电泳成M型可能是缓冲液的问题,或者是电压太大,可能试着换下缓冲液,另外,你的体系是多少,PCR程序可以勇参考一下这里的:95度,2分钟,94度,30秒,退火,30秒,72度延伸(具体以产物长度确定时间),另外,使用的酶有没有问题,请仔细检查一下.
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2楼2008-12-22 11:20:31
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
我的程序是96℃，5min;94℃,50S,36℃ 45S,72℃,90S,40次循环
20ul体系 TAkaRa Taq 酶2U，原来用的100V，1小时，今天80V 80min钟
感觉还是不行，而且我的条带很少 ，RAPD随机引物能扩增出挑带的很少
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3楼2008-12-23 13:54:08
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

我的RAPD电泳图

两张图片除了引物不同其它条件都相同，每两个孔一个引物RAPD随机引物怎么扩不出东西来啊　感觉别人做的条带都很多啊
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4楼2008-12-23 14:05:33
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-22 13:12
可能电泳缓冲液有问题，还有就是你倒胶的时候倒的不好，不平，或者没有等胶冷却就倒了
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帮助虫友，提升自己
5楼2008-12-23 21:02:35
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yanshg2002

新虫 (初入文坛)
谢谢，有收获，看来电泳也大有学问
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6楼2008-12-31 00:56:41
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cjl2008bio

铜虫 (初入文坛)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-22 13:12
有点m型是正常的，就是点样孔做得不是很好或者是电压不是很稳定。至于没有条带，一般来说就是没有扩增出来，不考虑电泳体系的原因。扩增不出来的原因很多，先换taq酶和缓冲液，再考虑引物和模板。
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7楼2008-12-31 10:35:34
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