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牛血清白蛋白酶解液的分离与纯化
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首先精密秤取牛血清蛋白6 mg溶解于1 mL 100 mM 的 NH3HCO3（约pH 8.4）缓冲液中。然后加入100 μL浓度为100 mM 二硫苏糖醇并在55 oC 条件下水浴反应60min。溶液冷却至室温后加入100 μL浓度为500 mM碘乙酰胺。溶液在室温条件下继续孵育45 min, 注意避光。最后得到的溶液用25mM的NH3HCO3稀释（加入8 mL），然后蛋白溶液按照蛋白质/胰蛋白酶质量比为 25/1的量加入胰蛋白酶。胰蛋白酶充分溶解后置于37 oC水浴15h。反应结束后用10%三氟乙酸调pH到2.7。然后C18固相萃取，萃取的最后一步用乙腈洗脱，再旋蒸到0.5 mL用水定容到2mL。样品进常规液相，响应在10 mV以下,我同倍扩大一倍量，操作一样，为啥响应一点也没有增加？？已经尽量保持实验操作一致了。 求做过这些实验的朋友指导下，不知道哪里出了问题，正在苦闷中…… |
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