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cynjau

金虫 (小有名气)

[交流] 交换和自杀的关系?

我遇到一个很麻烦的问题:
用于同源交换的自杀载体进入目的菌株,却不能自杀!这样我无法得到重组子.想请教大家:自杀和重组的关系如何?
我有个设想如下,不知道合理吗?
(1)首先,将双交换载体导入目的菌株后,进行第一步双交换。此时,由于载体不自杀,我无法获得单交换子。
(2)由于我的载体上有sacB,我将第一步的菌扩大培养后。加入一定浓度的蔗糖,这样要是没有双交换菌株就会死亡。
我再将这些菌液涂在含蔗糖的培养基上,要是长出来的就是双交换子。
不知道这样的设想能否成立?
还请大家指点一下?特别是交换和自杀的关系?
带有同源片段的载体进去不自杀,会不会同源交换?
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gxj071084

铁虫 (初入文坛)

我构建的是自杀质粒,然后导入目的菌,使其发生同源重组
2楼2008-12-21 17:11:21
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

你的质粒只要没有宿主的DNA复制起始序列类型,就是自杀。整合可以伴随DNA复制而复制。游离却因为无法复制而被稀释。
细推物理须行乐。
3楼2008-12-21 19:24:30
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