| 查看: 2863 | 回复: 0 | |||
[求助]
MES在此方法中的作用，是否可以用其他缓冲液代替？
|
|
测酵母胞内pH: 用50mM的MES缓冲液清洗2次,每次5mL。(MES缓冲液,含有110mM NaCl,5mM KCl,1mM MgCl2,pH6.20,1℃。)离心得到的酵母泥用上述1℃的3mLMES悬浮。0.03mL,10mM的乙酰化的5(6)-羧基荧光素溶液(用DMSO配制)加入到上述酵母上清液中,剧烈震荡1min,使混合均匀,并把它保持在冰浴中15min。再混匀,再保持15min,然后用1℃的MES清洗3次有5(6)-羧基荧光素的酵母泥,每次用5mLMES。上述离心后的酵母泥中加入7mL,50mM的柠檬酸盐-磷酸氢二钠缓冲液(1℃ ,pH3.0,含有110 mM NaCl,5 mM KCl,1mMMgCl2)。离心后,再用上述缓冲液清洗2次,每次用5mL。离心得到的酵母泥再加入上述缓冲液7mL。把它保持 在冰浴中90min(每隔30min摇晃一次,以免沉淀)。离心后,酵母泥在室温条件下,重新用上述缓冲液3.0mL悬浮。将上述悬浮液立即在激发波长为Ex=488nm,发射波长为Em=518nm下测定荧光值,再在激发波长为Ex=441nm,发射波长为Em=518nm下测定荧光值,根据标准曲线,可以得到响应的胞内pH值。 看到国外用流式细胞仪的方法里面都没有用MES，这篇是用荧光酶标仪，不知为何这里要有MES。请问这里的MES是否有特殊作用？能否用其他缓冲液代替？请教了  |
回复此楼» 猜你喜欢
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有4人回复
-
基金申报
已经有3人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有9人回复
-
溴的反应液脱色
已经有6人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
-
推荐一本书
已经有10人回复
-
参与限项
已经有5人回复
-
有没有人能给点建议
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有12人回复