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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于扩基因的疑问? 已有1人参与

pcr扩基因,之后连blunt载体,导入大肠杆菌感受态DH10B,菌落pcr之后测序,测序结果里可以可以找到载体上的菌落pcr引物M13F\R,却找不到我扩基因的上下游引物,而且扩出的基因也不是我想要的,想问为什么会出现这种情况?我用扩增引物和测序结果比对,发现基本上是匹配不上的,最相近的序列也差五六个碱基呢,为什么还能扩出来?求大神指教
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ibelieveicanfly
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能长出抗性菌落 肯定是有载体骨架上的抗性基因表达了 但是空白质粒和阳性质粒都能表达抗性基因
能用M13扩出来也正常
差56个碱基 基本上就是你的目的序列了 突变多一点而已
排除污染 优化PCR反应条件 切胶回收等等
再试一次 五六个突变没法再做定点突变了
2楼2017-02-24 16:31:34
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