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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于扩基因的疑问？
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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于扩基因的疑问？ 已有1人参与

pcr扩基因，之后连blunt载体，导入大肠杆菌感受态DH10B，菌落pcr之后测序，测序结果里可以可以找到载体上的菌落pcr引物M13F\R,却找不到我扩基因的上下游引物，而且扩出的基因也不是我想要的，想问为什么会出现这种情况？我用扩增引物和测序结果比对，发现基本上是匹配不上的，最相近的序列也差五六个碱基呢，为什么还能扩出来？求大神指教
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ibelieveicanfly
1楼 2017-02-24 15:49:13
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能长出抗性菌落 肯定是有载体骨架上的抗性基因表达了 但是空白质粒和阳性质粒都能表达抗性基因
能用M13扩出来也正常
差56个碱基 基本上就是你的目的序列了 突变多一点而已
排除污染 优化PCR反应条件 切胶回收等等
再试一次 五六个突变没法再做定点突变了
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2楼2017-02-24 16:31:34
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