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wzm512

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 已有3人参与

已知m rna序列，构建过表达载体，利用找到的cds设计引物，一直做不出来，求帮助，我也不

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1楼 2017-02-24 15:44:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

艰苦温度

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做不出来的情况有很多，你具体是在哪个环节做不出来？

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2楼2017-02-24 16:56:49
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-25 10:12:41
问题太多了吧，在你pcr之前，mRNA提取，反转录，引物设计都有可能出问题
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···
4楼2017-02-25 09:29:51
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lovmol

新虫 (小有名气)
先用cdna在utr区设计引物扩增，然后再用扩增产物当模板，用cds引物扩增

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5楼2017-02-25 10:24:24
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普通回帖

wzm512

新虫 (初入文坛)
扩cds扩不出来，我也不知道cds找的对不对

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3楼2017-02-24 21:49:29
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wzm512

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lovmol at 2017-02-25 10:24:24
先用cdna在utr区设计引物扩增，然后再用扩增产物当模板，用cds引物扩增

怎么分析utr，我利用ncbi  的orf分析，发现好多orf，不太确定怎么弄

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6楼2017-02-25 10:29:22
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wzm512

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wzm512 at 2017-02-25 10:29:22
怎么分析utr，我利用ncbi  的orf分析，发现好多orf，不太确定怎么弄
...

怎么找到那个是我要的，拿orf比对，发现全是我要的，

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7楼2017-02-25 10:35:06
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莫等闲111

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【答案】应助回帖

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在NCBI中找CDS那个。
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8楼2017-02-25 18:19:11
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wzm512

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 莫等闲111 at 2017-02-25 18:19:11
在NCBI中找CDS那个。

cds比找的orf长，不太懂

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9楼2017-02-25 20:02:34
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莫等闲111

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【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by wzm512 at 2017-02-25 20:02:34
cds比找的orf长，不太懂
...

CDS是编码一段蛋白质的序列，而orf是一个起始密码子到对应终止密码子的一段序列。但多个基因编码共同编码一个蛋白时，那么即多个orf 构成一个CDS。

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10楼2017-02-25 20:31:00
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