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wzm512

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 已有3人参与

已知m rna序列,构建过表达载体,利用找到的cds设计引物,一直做不出来,求帮助,我也不

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艰苦温度

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做不出来的情况有很多,你具体是在哪个环节做不出来?

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2楼2017-02-24 16:56:49
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小冀-

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-25 10:12:41
问题太多了吧,在你pcr之前,mRNA提取,反转录,引物设计都有可能出问题
···
4楼2017-02-25 09:29:51
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lovmol

新虫 (小有名气)

先用cdna在utr区设计引物扩增,然后再用扩增产物当模板,用cds引物扩增

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5楼2017-02-25 10:24:24
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wzm512

新虫 (初入文坛)

扩cds扩不出来,我也不知道cds找的对不对

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3楼2017-02-24 21:49:29
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wzm512

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lovmol at 2017-02-25 10:24:24
先用cdna在utr区设计引物扩增,然后再用扩增产物当模板,用cds引物扩增

怎么分析utr,我利用ncbi  的orf分析,发现好多orf,不太确定怎么弄

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6楼2017-02-25 10:29:22
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wzm512

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wzm512 at 2017-02-25 10:29:22
怎么分析utr,我利用ncbi  的orf分析,发现好多orf,不太确定怎么弄
...

怎么找到那个是我要的,拿orf比对,发现全是我要的,

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7楼2017-02-25 10:35:06
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莫等闲111

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在NCBI中找CDS那个。
站内信:http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
8楼2017-02-25 18:19:11
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wzm512

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 莫等闲111 at 2017-02-25 18:19:11
在NCBI中找CDS那个。

cds比找的orf长,不太懂

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9楼2017-02-25 20:02:34
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莫等闲111

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【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by wzm512 at 2017-02-25 20:02:34
cds比找的orf长,不太懂
...

CDS是编码一段蛋白质的序列,而orf是一个起始密码子到对应终止密码子的一段序列。但多个基因编码共同编码一个蛋白时,那么即多个orf 构成一个CDS。

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站内信:http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
10楼2017-02-25 20:31:00
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