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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

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专业: 环境微生物学

[交流] 求助：关于同源重组目的基因的长度问题

做基因敲除时构建重组DNA时，部分目的基因＋抗性基因＋部分目的基因，那么部分目的基因的长度多少时同源重组率高？我看文献有几百BP的，有上千的，有的甚至刚一百BP.

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细推物理须行乐。

1楼 2008-12-19 19:40:48

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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

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虫号: 494550
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专业: 环境微生物学

根据同源重组过程中外源打靶基因在核基因组上整合的结果，可将基因打靶区分为插入型和置换型两种不同的形式(图8-10)。
　　在插入型基因打靶中，两条同源DNA分子之间只发生一次交换，即一次同源重组，打靶基因便插入到目标基因的序列中。
　　置换型基因打靶的分子机理比较复杂，它涉及到在打靶基因与目标基因之间发生两次紧密连锁的同源重组事件。目前最普遍使用的置换型基因打靶的方式是，用完全失活的或无效的打靶基因，取代核基因组上的野生型的目标基因。这种基因打靶技术特称为基因剔除(gene-knockout)，可以比较容易地检测基因的功能。
　　其主要的应用有如下几个方面：
　　第一，能够将经体外修饰改造的突变基因或某种新的外源基因，取代受体细胞核基因组上的目标基因，使基因组获得新的遗传信息，以便使科学工作者能够相当有效地检测基因的功能。
　　第二，也可以在核基因组的目标基因序列附近，插入一个具相同调控序列的同源基因拷贝。如此既可形成重复基因，提高表达效率和相关的蛋白质产量，又可能不会破坏目标基因及其邻近基因的功能。
　　第三，还可以在核基因组内部增加一段DNA序列，或造成序列缺失，甚至是单碱基定点突变等，从而达到抑制或纠正目标基因的功能，为遗传疾病的基因治疗提供技术途径。