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免疫组织化学抗原修复 由于石蜡切片标本多数使用甲醛固定，甲醛在组织中所形成的醛键、羧甲基等封闭了部分抗原决定簇，或由于蛋白分子之间的交联而使抗原决定簇隐蔽。因 此在染色前有些抗原需要先进行抗原修复或暴露才能使组织中的抗原抗体充分结合，出现理想的染色结果。至于哪种抗原需要进行修复。需在建立染色程序时确 定。常用的方法有加热抗原修复法和酶消化法两种。经大量试验验证．加热抗原修复法优于酶消化法，其机制目前仍不清楚，可能是加热打开了组织抗原因甲醛固定所引起的抗原决定簇的交联，因此使免疫组织化学染色的敏感度大幅度提高。 (1)加热修复法：加热修复法分为高压加热修复法和微波修复法两种： ①高压加热修复法：取一定量枸橼酸盐缓冲液(pH＝6．0)于高压锅中，大火加热直至沸腾。将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放人己沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣紧压力阀，继续加热至喷汽。从喷汽开始计时．1～2分钟后，高压锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗2次，再用PBS冲洗2次，每次3分钟。注意加热时间长短的控制很重要，从组织切片放人缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5―8分钟为好．时间过长可能会使染色背景加深。缓冲液的量必须保证能浸泡到所有切片，用过的枸橼酸缓冲液不能反复使用。 ②微波修复法：取一定量pH 6．0枸橼酸盐缓冲液(缓冲液量不得小于500m1)，于微波盒中，微波加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上。放人己沸腾的缓冲液中，中高档微波继续处理15―20分钟，取出微波盒冷却至室温，从缓冲液中取出玻片。先用蒸馏水冲洗2次，之后用PBS冲洗2次，每次3分钟。 (2)胰蛋白酶消化修复法：主要用于细胞内抗原的显示。使用0．1％氯化钙液(pH7．8)制成0．1％胰蛋白酶液，37℃孵育切片15～30分钟，之后用PBS洗涤3次，每次3分钟。 (3)胃蛋白酶消化修复方法：主要用于细胞间质抗原的显示。一般使用浓度为0.4％，消化时间为37℃，30～180分钟。 |
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