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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒构建
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lipengyun37

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒构建 已有3人参与

为什么我构建质粒时。目的序列连进载体之后。测序发现目的序列中间缺少几十bp.有没有哪个虫友遇到过相似的问题呢？新手求助！！！

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1楼 2017-02-13 23:34:20
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
ligase有外切酶活性，不能ligation太久

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-02-14 08:13:15
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以多测几个样，如果都是同样问题，那就是pcr出问题了。检查一下模板什么的

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2楼2017-02-14 00:07:59
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1. 有没有做过PCR产物直接送测序？NCBI的参考序列与实际DNA模板可能存在种系差异（突变体）。

2. 也可以考虑重做。PCR产物连接T载体送测序，验证后直接从T载体上酶切目的片段。

3. 如果你们实验室有gateway体系，那构建载体估计不成问题。
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3楼2017-02-14 02:54:06
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